[发明专利]毛细管电泳两次在线反应分离复合物和反向筛选的方法

摘要

本发明涉及一种毛细管电泳两次在线反应分离复合物和反向筛选的方法，属于生物分离分析技术领域。所述方法为：对反应物进行毛细管区带电泳，进样：第一反应物、第一段电泳缓冲液、第二反应物、第二段电泳缓冲液和第三反应物，两次在线反应混和形成复合物后，经过检测窗口检测；第一、二反应物移速率慢，第三反应物迁移速率快，反应物为蛋白质和ssDNA；分离复合物时，第一、二反应物同为蛋白质或ssDNA，第三反应物为与第一、二反应物不同物质；反向筛选时，ssDNA先与反筛蛋白质作用，再与靶标蛋白质作用，得到与靶标蛋白质特异性更强的ssDNA。所述方法通过一次电泳实现两次筛选，可根据靶标蛋白质不同实现在线反筛。

主权项

一种毛细管电泳两次在线反应分离复合物和反向筛选的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：对反应物进行毛细管区带电泳，进样顺序先后依次为：第一反应物、第一段电泳缓冲液、第二反应物、第二段电泳缓冲液和第三反应物，在一次电泳过程的毛细管中实现两次在线反应混和形成ssDNA与蛋白质的复合物后，依次通过毛细管末端的检测窗口，分离收集电泳产物；所述第一反应物和第二反应物为在毛细管中迁移速率慢的反应物，第三反应物为在毛细管中迁移速率快的反应物；当毛细管电泳两次在线反应分离复合物时，第一反应物和第二反应物同为蛋白质或同为ssDNA，当第一反应物和第二反应物同为蛋白质时，第三反应物为ssDNA，当第一反应物和第二反应物同为时ssDNA时，第三反应物为蛋白质；当毛细管电泳两次在线反应反向筛选时，ssDNA先与反筛蛋白质作用，剩余的ssDNA再与靶标蛋白质作用，最终得到与靶标蛋白质特异性更强的ssDNA，第一反应物和第二反应物同为蛋白质，且第一反应物为反筛蛋白质，第二反应物为靶标蛋白质，第三反应物为ssDNA，当仅通过毛细管中迁移速率的速度无法保证ssDNA先与反筛蛋白质作用时，调节第一段电泳缓冲液和/或第二段电泳缓冲液的进样时间，使ssDNA先与反筛蛋白质作用，剩余的ssDNA再与靶标蛋白质作用。