[发明专利]慢性肾小球肾炎肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法

摘要

本发明公开了一种慢性肾小球肾炎肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，包括以下步骤：样品收集；纳米磁珠预处理；样品预处理；唾液样品洗脱上样；纳米磁珠活化；唾液样品上样；质谱分析；数据采集；数据分析；建立诊断模型。本发明运用液态芯片结合MALDI‑TOF‑MS技术对慢性肾小球肾炎肾虚证患者与正常对照组的睡液蛋白质进行表达谱检测，从唾液蛋白质组初步筛选出可用于慢性肾小球肾炎肾虚证病证结合诊断的具有特异性的生物标记物，探索并建立了相关病证结合的诊断模型。与传统的疾病生物标志物相关的检测方法相比较，具有无创伤性、操作简便、快捷、敏感性及特异性高等特点。

主权项

一种慢性肾小球肾炎肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品收集；(2)纳米磁珠预处理；(3)样品预处理：取出冷冻保存的唾液样本，冰上解冻，所有唾液样本均1次冻融，取5μl唾液加入10μl的U9裂解液，混合孵育30min后，加入185μl的Wash Buffer稀释；(4)唾液样品洗脱上样：④向每个装有纳米磁珠的PCR管中分别加入100μl预处理后的唾液样品，混匀，置于室温孵育30min，将PCR管置于磁铁上孵育1min，去除上清液；⑤每管加入100μl的Wash Buffer洗脱5min，然后将PCR管置于磁铁上孵育1min，去除上清液；⑥再重复步骤⑤操作一次；⑦在PCR管中加入10μl的Elution Buffer洗脱5min，将PCR管置于磁铁上孵育1min，取5μl上清液移至另一个PCR管中；⑧将装有5μl上清液的PCR管中加入5μl的CHCA饱和溶液，充分混匀，至样品颜色发灰，而没有明显的沉淀时，取2μl混合溶液，加样到Au/Steel芯片上，晾干后放入仪器读取；(5)质谱分析：采用质谱仪读取芯片信息，设置激光强度为190，灵敏度为5；(6)数据采集；(7)数据分析；(8)建立诊断模型：采用决策树算法计算出多个变量变化对两样本的判别价值，确定诊断模型。