[发明专利]慢性肾小球肾炎肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法

说明书

技术领域

本发明属于蛋白质谱应用技术领域，具体地说，涉及一种慢性肾小球肾炎肾虚证 唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法。

背景技术

“唾液-脾肾关联”假说是吴正治教授基于传统中医理论和现代研究成果提出的理 论新假说。该假说的核心观点是：唾液蛋白质是中医脾肾-唾液关联理论的主要物质基础， 唾液蛋白的质与量可以反映中医脾肾二脏的生理状态和病理变化。

首先，中医传统理论认为，“脾为涎，肾为唾”，唾液为脾肾所化，该假说具有传统中 医学的理论基础；其次，蛋白质是生命的本质载体，也是唾液最主要和最重要的成分，因此， 唾液蛋白质可能是“脾为涎，肾为唾”的微观物质基础，该假说符合现代生命科学的基本原 理；最后，现代医学业已研究表明，唾液蛋白成分含量受人体内种种病理生理变化的影响。

近年来，安全无创便捷的唾液探测研究已经引起人们相当大的兴趣，唾液被认为 是“具有相当的科研与临床潜力的生物液”，已广泛用于生物标志物的研究，而后基因组期 间迅速崛起的蛋白质组学为唾液诊断的突破提供了强大的方式学平台。随着生化小量评定 技术的进步，使无创伤唾液检查代替血液用于疾病早期诊断成为可能，近年来西方发达国 家该方面的研究进展迅速，而我国该范畴的前沿研究非常罕见；中医学对唾液与脾肾的生 理病理联系早有论述，但其现代生命科学基础和内涵有待反映；蛋白质是生命现象的本质， 也是唾液的最主要、最重要的成分，但目前的研究多为主观选择的单个指标探测研究，其定 局结论均具有较大的局限性；蛋白质组学，是在后基因组期间最重要的前沿范畴之一，在蛋 白质组层次上，进行的生命科学研究，探索未知的东西，不代入研究者的主观指标选择，能 更客观地反映疾病和证候的本质和变化规律；同时，脾虚、肾虚作为脾肾功能的特殊状态， 无疑是研究“唾液-脾肾关联”假说的理想病理模版。此外，作为人体疾病某一阶段病理本质 囊括的“证”，也必有其蛋白质组水平上的生命物质基础。

慢性肾小球肾炎(chronicglomerulonephritis，CGN)是临床上的常见病和多发 病，以不同程度蛋白尿、血尿、水肿和高血压为基本临床表现，起病隐匿，病程迁延，患者可 伴有不同程度的慢性肾功能减退，并最终发展为慢性肾衰竭。患者年龄跨度较大，早期诊断 对疾病的早期预防和治疗有重要意义。

蛋白质组学(proteomics)是研究一种细胞、组织或完整的生物体所拥有的全套的 蛋白质，在蛋白组层次进行的生命科学研究，应用于疾病研究，可以绘制蛋白质图谱，寻找 疾病特异性蛋白，并能提供治疗药物的候选靶点，为药物研制提供依据。唾液是人体不可缺 少的一种重要体液，血液成分如多种激素、氨基酸、电解质、免疫球蛋白、肌酐等均可通过毛 细血管壁的唾液血液屏障进入唾液，作为人体体液的一部分，其成分含量的变化，受体内种 种病理生理变化的影响。相比血清及组织检测手段，唾液检测具有很多优点，容易采集、样 本需要量较小、成本低、易于储存和运输，对病人无侵入性，此外，唾液中生物标记物检测对 疾病诊断具有很强的敏感性和特异性。因此，运用唾液检测辅助诊断临床疾病将成为一种 新趋势。国外多项研究显示唾液可作为区分肿瘤的良、恶性的生物标记物。唾液作为一种成 分复杂、具有多种生物学功能的重要体液，唾液中独特、丰富的蛋白质成分毫无疑问是潜在 的肿瘤及疾病的理想的生物标记。

目前在恶性肿瘤方向上的蛋白质组学研究大多针对血清分析，而对于常见恶性肿 瘤患者的唾液蛋白质检测尚未普及。由于唾液是血液的超滤成分，血液中的许多物质在唾 液中也同样存在，唾液可以反映血液中各种分子水平的变化。目前恶性肿瘤的确诊多属于 癌症晚期，而早期检测诊断手段有待开发研究，唾液蛋白质的检测成为一种新趋势。

因此，提供一种诊断模型简便、快速、标本用量少，灵敏度高，特异性好的慢性肾小 球肾炎肾虚证唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型的建立方法，就成为该技术领域急需解决的 技术难题。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决现有技术对慢性肾小球肾炎肾虚证的检测复杂，检测周 期长，灵敏度低，特异性差的问题，提供了一种慢性肾小球肾炎肾虚证唾液蛋白指纹图谱分 子诊断模型建立方法。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种慢性肾小球肾炎肾虚证唾液蛋白指纹 图谱分子诊断模型建立方法，包括以下步骤：

(1)样品收集；

(2)纳米磁珠预处理；