[发明专利]一种草莓花青素调节基因功能标记

摘要

本发明提供了一种草莓花青素调节基因功能标记，属于果树育种及分子遗传学领域。其特征在于通过对草莓花青素调节基因MYB10在红色和黄色草莓中序列比对，发现在二者编码区存在一个单核苷酸突变，根据该单核苷酸的差异设计了dCAPS 标记Fv‑RY，该dCAPS 标记能将黄色、杂合红色及纯合红色草莓进行区分，且该标记与草莓果实颜色性状共分离。利用该功能标记可以快速准确的从大量草莓种质资源中筛选鉴别带有花青素调节基因的材料，进行分子标记早期选择育种，将极大的加速草莓果实色泽育种的进程。

主权项

一种草莓花青素调节基因功能标记，其特征是，具体步骤如下：（1）草莓花青素调节基因的序列分析：草莓花青素调节基因MYB10在红色和黄色果实中仅仅存在一个单核苷酸差异，该核苷酸位于MYB10基因第一个外显子上第35个核苷酸，在红色果实中为G，而在黄果为C；（2）草莓花青素调节基因功能标记的方法：根据上述红色和黄色草莓中编码区第一个外显子区域存在的单核苷酸突变开发了草莓花青素调节基因的功能标记，该功能标记的正反引物序列为：上游引物（F）：5＇－TTCGGTGTGAGAAAAGGTGAAT－3＇下游引物（R）：5＇－CTGTTTAAGCCTGCAAGTACAG－3＇该功能标记经PCR扩增、酶切和电泳后，在红色果实草莓中显示200 bp的片段，而在黄色草莓果实中显示180 bp的片段；（3）功能标记的应用方法所述的引物序列在筛选红色和黄色草莓果实中的应用，分别进行PCR扩增、酶切和琼脂糖凝胶分析；PCR扩增的体系和反应程序为：20 μl PCR 反应体系为：模板 DNA 50 ng，Taq 酶1 U，10 μ mol 的上、下游引物各0.8 μl，0.3 μl of 10 mM dNTPs，2.0 μl of 10 × PCR buffer，1.2 μl of 25 mM MgCl₂，用无菌蒸馏水补充反应体系至20 μl；PCR 反应程序为：先95 ℃ 3 min；然后95 ℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 20 s，共 33个循环；最后72℃ 5 min，4 ℃保存；酶切体系、时间和温度为：20 μl 酶切体系为：PCR产物5 μl，内切酶HinfI 0.2 μl，内切酶缓冲液2 μl，最后用无菌蒸馏水补充反应体系至20 μl；酶切反应时间为3小时，温度为37℃，扩增产物在3 %的琼脂糖胶电泳分离；（4）根据上述草莓花青素调节基因功能标记的方法，其特征在于可用于对草莓果实颜色进行早期辅助选择，加快育种进程。