[发明专利]无核葡萄快速育种方法

摘要

本发明涉及葡萄的育种技术，特别是涉及一种无核葡萄快速育种方法；本发明采用步骤：A.父母本的选择，B.花粉的收集，C.母本去雄授粉，D.胚挽救培养及成苗，E.嫁接，F.当年结果鉴定；本发明通过胚培手段，可以采用有无核倾向的品种做母本，在胚发育到一定阶段，还没有退化之前取出，接种在外来培养基上进行诱导萌发，继代培养后成为正常的试管苗，从而提高无核几率，提高育种效率；将所得的试管苗继代培养，促进成熟，待基部几节半木质化后，嫁接在成龄葡萄树上，实现当年结果；通过鉴定果实的种子情况，确定杂交后代是否为无核，从而缩短育种年限3‑4年。

主权项

无核葡萄快速育种方法，其特征在于，具体方法如下：(1)试管苗的获得A：父母本的选择选择有无核倾向的品种做母本，具有优良特点的品种做父本；父本的花期最好早于母本，若晚于母本，可采取异地取粉。B：花粉的收集在选定的父本品种开花初期，采下发育正常的花序，去除顶部约三分之一发育不好的小花序和已经展开的花朵；将保留的健康花朵取下花冠及花药后用纱网过筛，在室温下凉干至花药裂开，装入处理干净的小瓶或光滑的纸袋中，封口，放在装有无水CaCO₃的干燥器中，4℃低温保存，待用。C：母本去雄授粉选择母本树上发育一致的花序若干，开花前1‑2天进行人工去雄，去雄时间最好是早晨或上午，并注意去除发育不良及已经打开的花朵，保证母本的纯度；之后立即套袋和挂牌标记，一般第二天柱头上开始分泌水滴状粘液，当出现有粘液时用脱脂棉蘸取备好的花粉点到柱头上，进行人工授粉，每天1次，连续授粉2‑3次，注意授粉后立即套袋。D：胚挽救培养及成苗授粉40‑55天后，视母本胚败育情况，从田间取回果穗，进行胚挽救培养；首先剥取胚珠：将果穗用流水冲洗3‑5分钟，剪成3‑5粒的小穗于烧杯中，置超净工作台上，用75％乙醇浸泡约1分钟，无菌水冲洗3‑5次，再用0.1％升汞消毒7分钟，无菌水冲洗3‑5次，切开幼果取出胚珠接种于内装40mL培养基的100mL三角瓶中，每瓶接种10‑20粒，胚珠培养基采用B5或Nistch为基本培养基，附加BA(6‑苄氨基嘌呤)0.1‑1.0mg/L、IAA(吲哚乙酸)1.0‑2.0mg/L、GA(赤霉酸)0.3‑0.8mg/L、6％蔗糖、0.6％琼脂、0.1％活性炭；培养8周后，在无菌条件下剥取裸胚接种于胚萌发培养基中，以WP为基本培养基，附加0.1‑0.5mg/L IBA(吲哚丁酸)、2％蔗糖、0.6％琼脂、0.1％活性炭；继续培养10‑15天，转移至成苗培养基进行继代培养，采用1/2MS为基本培养基，附加IBA(吲哚丁酸)0.1‑0.5mg/L、2％蔗糖、0.6％琼脂、0.1％活性炭，在成苗培养基中培养20‑30天直至成苗，培养条件为温度25℃±2℃，光照每天16h，光强度2000Lux。E：嫁接在3月将基部已经成熟的试管苗为接穗，枝条粗度1.5‑2.0mm，长度3‑4cm，砧木选择2‑3年生且长势强的品种，采用常规劈接法进行嫁接，每株嫁接两个接穗，将接口用封口膜封严，再用小拱棚罩起，拱棚高度40cm左右；拱棚内要求温度20‑30℃和饱和的湿度，天热时覆遮阴网；接后10‑15天芽眼膨大，20天后萌发，40天后主梢高度可达20cm，50天后逐渐放风，遇阴雨天后去掉拱棚进行大田管理。F：当年结果鉴定当新梢长到39‑41cm时，应及时摘心；每个主梢顶端留一个副梢继续生长，其余副梢均留2‑3片叶摘心；6月上旬后，主梢高度在95‑105cm，在反复摘心1‑2次后，6月下旬可出现花穗，这样按常规大田管理及时整形、施肥、浇水、打药，确保果实正常成熟，即可鉴定出是否为无核品种。