[发明专利]一种含内标的用于检测丙型肝炎病毒核酸的试剂盒和检测方法

摘要

本发明公开了一种用于检测丙型肝炎病毒核酸的试剂盒和一种测定检测丙型肝炎病毒核酸的方法。试剂盒中在RT‑PCR反应液中采用了UNG酶去除可能存在的污染产物，可以避免假阳性结果产生，也使检测结果更为准确；同时用Tth酶体系进行反转录及扩增，避免了双酶体系反应条件差异带来的干扰；此外引物在引物覆盖区域较易发生变异的位点引入了核苷类似物I碱基，可避免因丙型肝炎病毒基因突变而引起漏检，同时保证不同基因型样本的检测灵敏度；所设计的参与整个样本检测的内标避免了假阴性结果的产生。因此该试剂盒可高灵敏度、高特异性的检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒核酸。此外检测方法中采用RT‑PCR一步法对丙型肝炎病毒核酸进行检测，减少了操作步骤也缩短了操作时间。

主权项

1.一种含内标的用于检测丙型肝炎病毒核酸的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：RT‑PCR反应液、阴性质控品、阳性质控品、校准品和内标；所述RT‑PCR反应液包括：RT‑PCR预反应液、第一引物、第二引物、第一探针和第二探针；其中所述第一引物为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的引物；其中所述第二引物为SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的引物；其中所述第一探针为SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的探针，或为所述SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的反向互补序列的探针；其中所述第二探针为SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的探针，或为所述SEQ ID NO.4所示核苷酸序列的反向互补序列的探针；其中所述RT‑PCR预反应液包括RT‑PCR缓冲液、UNG酶、Tth酶、dNTPs和dUTP；其中所述内标由内标假病毒颗粒用磷酸缓冲液稀释制备而成，其中内标假病毒颗粒为按照SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列人工合成制备所得。