[发明专利]DNA5-甲基胞嘧啶与5-羟甲基胞嘧啶基因图谱测序方法有效
| 申请号： | 201610119096.2 | 申请日： | 2016-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN105648537B | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 陆星宇;宋艳群 | 申请（专利权）人： | 上海易毕恩基因科技有限公司;上海易毕恩生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区中国（*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供一种DNA5‑甲基胞嘧啶与5‑羟甲基胞嘧啶基因图谱测序方法，包括以下步骤：(1)DNA的提纯与片段化预处理：将目的DNA提取后将其打断至平均50个核苷酸长度到10000个核苷酸长度的片段；(2)微量DNA的修复与接头引物连接：将预处理的DNA片段修复并与二代测序需要的测序接头引物连接；(3)共价标记5‑甲基胞嘧啶与5‑羟甲基胞嘧啶；(4)固相富集含有标记的5位修饰胞嘧啶的DNA片段，在固相上，用对应接头引物的PCR扩增引物进行扩增。取得的PCR产物，经纯化后即得到二代测序所需的基因组5位修饰胞嘧啶的分布图谱。本发明极大增强了固相表面与DNA修饰碱基结合的选择性和效率。 | ||
| 搜索关键词： | 测序 胞嘧啶 甲基胞嘧啶 接头引物 预处理 基因图谱 核苷酸 羟甲基 修饰 修复 共价标记 固相表面 微量DNA 基因组 片段化 提纯 富集 碱基 扩增 打断 图谱 | ||
【主权项】：
1.一种DNA5‑甲基胞嘧啶与5‑羟甲基胞嘧啶基因图谱测序方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)DNA的提纯与片段化预处理：将目的DNA提取后使用机械力或消化酶将其打断至平均50个核苷酸长度到10000个核苷酸长度的片段；(2)微量DNA的修复与接头引物连接：将预处理的DNA片段修复并与二代测序需要的测序接头引物连接；(3)共价标记5‑甲基胞嘧啶与5‑羟甲基胞嘧啶：将连接好接头引物的DNA片段中的5位修饰的胞嘧啶进行共价标记；(4)固相富集含有标记的5位修饰胞嘧啶的DNA片段：将标记的5位修饰的胞嘧啶的DNA片段在结合缓冲液中结合到固相上，对固相表面进行反复洗涤，去除未结合的DNA片段，(5)在固相上，用对应接头引物的PCR扩增引物进行扩增，取得的PCR产物，经纯化后即得到二代测序所需的基因组5位修饰胞嘧啶的分布图谱。
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