[发明专利]一种利用牦牛血制备无水氯化血红素的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，涉及一种利用牦牛血液制备无水氯化血红素的方法；其特征在于按照红细胞的收集、红细胞的破碎、血红蛋白的酶解与氯化血红素的提取步骤进行。本发明利用牦牛血液制备无水氯化血红素，使动物血液资源得到了充分有价的利用。制备无水氯化血红素的方法简单，易于操作，所用化学试剂少、成本较低、环境污染较低，便于工业化生产。

主权项

一种利用牦牛血液制备无水氯化血红素的方法，其特征在于按照红细胞的收集、红细胞的破碎、血红蛋白的酶解与氯化血红素的提取步骤进行；具体如下所述： （1）红细胞的收集用50 ml试管收集新鲜的牦牛血液20ml，用纱布进行过滤，除去较大杂质，收集过滤液，静置1小时后待血液凝固分层后，吸去上层淡黄色的液体, 得到下层红细胞凝固物12ml；（2）红细胞的破碎在红细胞凝固物中添加0.5～1.25倍的去离子水，放入超声波中进行破碎15min，同时用玻璃棒进行搅拌，使固体凝固物充分分散，同时使红细胞破碎，释放血红蛋白；将溶液快速的倒入六个小试管中，在60℃避光条件下加热30 min，之后用3000 r/ min 离心机离心10min ,将六个小试管中的上层液体倒入到20ml锥形瓶中，去除下层变性的杂蛋白, 得到血红蛋白溶液；（3）血红蛋白的酶解将血红蛋白溶液的用HCl0.1mol/L标准溶液调节PH=6.8～7.0，放于50℃恒温水浴锅中加热20 min，加入酶活力为4000u/g中性蛋白酶0.3g,温度45℃；水解5小时后加入酶活力为2000u/g风味酶0.5g，调节至pH=6.8～7.0, 温度53℃；水解反应完成后，加热煮沸灭酶；（4）氯化血红素的提取血红蛋白经酶解后，肽链被断开，水解液中有血红素，血红素肽及肽片段，用HCl0.1mol/L溶液调pH=4.5后，加入质量浓度1g/100mL的乙酸钠溶液，以3000 r/ min 转速离心10min析出沉淀，收集沉淀，依次用离子水、体积分数50%的乙酸液、体积分数95%乙醇溶液洗涤一次，再用乙醚洗涤两次，在零下20℃冷冻干燥6小时，得到氯化血红素。