[发明专利]对橙色粘球菌JCH-04次级代谢产物分离纯化提取抗霉枯草菌素的方法

摘要

本发明公开了对橙色粘球菌JCH-04次级代谢产物分离纯化提取抗霉枯草菌素的方法，该橙色粘球菌JCH-04（Myxococcus fulvus JCH-04）在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏；取菌种接种于种子培养基的摇瓶中培养得种子液；将种子液接种于发酵培养基的三角瓶中培养得发酵液；将发酵液过滤，收集树脂装入层析柱中，洗脱液浓缩得粗提物；粗提物中加入水和乙酸乙酯，混匀后离心，吸取水相，干燥得冻干粉；冻干粉甲醇溶解，离心，取上清液浓缩，通过Sephadex LH-20凝胶层析分离，收集140~180min馏分；馏分浓缩，通过半制备色谱分离，收集保留时间39.159 min和42.919 min的组分，分别为C14 Mycosubtilin和C15 Mycosubtilin。本发明方法简单，由橙色粘球菌次级代谢产物分离纯化提取抗霉枯草菌素，扩大了抗菌脂肽的提取途径。

主权项

对橙色粘球菌JCH‑04的次级代谢产物进行分离纯化提取抗霉枯草菌素的方法，该橙色粘球菌JCH‑04（Myxococcus fulvus JCH‑04）在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为：CGMCCNo.2893；其特征是：取一环菌种接种于装有25mL种子培养基的250mL摇瓶中，30℃ 180rpm培养2天得种子液；将种子液以体积比1:10接种于含有100mL发酵培养基的500mL三角瓶中，30℃ 180rpm培养6天，得发酵液；将1000mL发酵液用60目筛过滤，收集树脂，装入层析柱中，用质量浓度20%甲醇冲洗，再用纯甲醇洗脱，收集洗脱液，50℃旋转蒸发，浓缩得粗提物1.9631g；粗提物中分别加入50mL的水和乙酸乙酯，混匀后离心，吸取水相，冷冻干燥得冻干粉563.5mg；冻干粉用3mL纯甲醇溶解，离心，取上清液通过Sephadex LH‑20凝胶层析分离，流速0.6mL/min，收集140~180min的馏分；将馏分于50℃旋蒸浓缩至2mL，通过半制备色谱分离，收集保留时间为39.159 min和42.919 min的组分，分别为C14 Mycosubtilin和C15 Mycosubtilin。