[发明专利]一种抑制神经二次损伤的人少突胶质祖细胞的制备方法及其试剂盒与应用

摘要

本发明提供一种抑制神经二次损伤的人少突胶质祖细胞的制备方法，其中，所述方法包括构建两个神经胶质生长因子的病毒表达载体，共转染人少突胶质祖细胞，可高表达该两个神经胶质生长因子，即生长相关因子43和神经胶质生长因子2，发挥两者共同作用促进少突胶质细胞的修复，抑制少突胶质细胞损伤后的增生反应和胶质瘢痕形成，而造成的神经二次损伤；同时也利用了少突胶质祖细胞自身增殖分化能力，参与神经功能的修复，无成瘤性；并提供一种制备该抑制神经二次损伤的人少突胶质祖细胞的试剂盒。本发明提供的人少突胶质祖细胞将对神经系统疾病有着很好的治疗效果。

主权项

一种抑制神经二次损伤的人少突胶质祖细胞(OPCs)的制备方法，其特征在于，所述方法包括构建两个神经胶质生长因子的病毒表达载体，包装成病毒后，共转染人少突胶质祖细胞，制备成可高表达该两个神经胶质生长因子的少突胶质祖细胞，其无成瘤活性；其中，所述神经胶质生长因子为生长相关因子43(GAP‑43)和神经胶质生长因子2(GGF‑2)；在通过荧光定量PCR试剂盒按照使用说明书检测，转染了重组GAP‑43和GGF‑2病毒载体的OPCs传代培养到第10代后，其表达GAP‑43和GGF‑2基因均高于未转染的第1代OPCs，至少分别高45倍和67倍；脊髓损伤大鼠模型中，GAP43/GGF2病毒共转染的OPCs移植后28天BBB(Basso Beattie Bresnahan)运动功能评分改善值为20.00±5.00，皮层体感诱发电位CSEP波幅改善值6.00±1.00；所述GAP43/GGF2‑OPCs在治疗脊髓损伤大鼠中，其抑制星形胶质细胞增殖和胶质瘢痕形成。