[发明专利]一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法

摘要

本发明涉及一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法。本发明选取5年生优良毛坝大木漆的新鲜腋芽和顶芽作为外植体培养材料，经过消毒、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗与移栽等步骤，通过组培快繁技术对毛坝大木漆进行快速繁殖，以每10个毛坝大木漆外植体计算，繁殖系数为6.5，增殖周期为30天计算，除去污染耗损，其年繁殖量达到275万个以上，有效解决了毛坝大木漆数量稀少的问题，实现大面积快速繁殖的需求。且本发明通过准确选择采摘外植体的时间及树龄，提高了不定芽的诱导分化率，使其分化率达到85％以上。另外，本发明最终外植体的褐化率低于8％，污染率低于2％，采用闭盖炼苗的方式及合理的基质配比大大提高了幼苗的成活率，使成活率保持在90％以上。

主权项

一种毛坝大木漆的组织培养快繁方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：(1)外植体的取材：每年5月上旬采摘5年生优良毛坝大木漆的新鲜腋芽和顶芽作为培养材料；(2)消毒过程：将采摘的枝条去除叶片，用灭菌软毛刷清刷植株表面，去除污染物，用流水冲洗2h，再用无菌水冲洗3～5遍后，剪切成带有腋芽或顶芽的小段放置于无菌培养皿中，快速移至超净工作台内进行消毒，在无菌条件下用75％的乙醇浸泡25s后，放入含有0.01～0.015％的吐温‑80的0.1％升汞消毒液中，轻轻搅动10min，再用无菌水冲洗5～8次后，将外植体置于消毒滤纸上吸干水分后备用；(3)诱导培养：将腋芽及顶芽接触消毒液的伤口部分切除3～4mm，竖插于诱导培养基上，置于温度为24±2℃条件下进行暗培养，培养1～2天再转入新配制的诱导培养基内，反复3次后放置于光照强度为1800lx，光照时间为11～12小时/天的条件下光照培养20～25天，待长出3～4cm新芽即可；所述的诱导培养基的配方为：B5+1.0mg/L6‑BA+0.1mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂+0.5g/L青霉素，PH值为5.8～6.0；(4)增殖培养：将新芽从外植体上切下，其保留高度为2～3cm、2～3个叶片，将其竖插于增殖培养基上，置于温度为24±2℃，光照强度为1800lx，光照时间为10小时/天的条件下培养25～30天，待腋芽基部出现直径1～2cm愈伤组织且生出5～8个3～4cm的不定芽时，再将不定芽切下，在相同条件下放置到相同配方的增殖培养基中进行转接，使毛坝大木漆进行快速扩繁，其增殖倍数为6～8倍；所述增殖培养基配方为：MS+1.0mg/L6‑BA+0.5mg/LNAA+30.0g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂，pH为5.8～6.0，其中，所述增殖培养基配方MS中NH4NO3浓度为标准培养基的1/2；(5)生根培养：将2～3cm高的增殖苗竖插于生根培养基上，置于温度为24±2℃，光照强度为1800lx，光照时间为11～12小时/天的条件下培养25～30天，待株高达到3～4cm，根长1～2cm、大于4条生根数/株，即得到毛坝大木漆的生根苗，以待移栽；所述生根培养基配方为：1/2MS+0.5mg/LIBA+0.5mg/LNAA+30g/L蔗糖+5.0g/L活性炭+7.0g/L琼脂，pH为5.8～6.0；(6)炼苗与移栽：将生根瓶苗放置于自然光照条件下，室温24±2℃的温棚中进行闭盖炼苗，7天后取出生根苗，将根部的培养基清洗干净，用80％百菌清浸根5min后，移栽至基质配比为泥炭土：珍珠岩＝3：2的塑料篮中，淋足定根水，保持小环境相对湿度80％以上，7天后可逐步降低相对湿度，保持基质湿润，控制遮光率在60％～70％，温度26±2℃，15～20天后将成活的小苗移栽到基质相同、杯口直径为10cm的可降解无纺纸育苗袋中，养护2～3个月，苗高达30cm移至苗圃地培育成苗。