[发明专利]测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法有效
| 申请号： | 201610021350.5 | 申请日： | 2016-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN106970132B | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 曹成喜;钟冉;谢海洋;张强;沙敏·贾汉;肖华;樊柳荫 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | G01N27/447 | 分类号： | G01N27/447 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 郭国中 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，所述方法包括：将芯片的通道部分灌满凝胶，阳极池中注入盐酸溶液与背景电解质溶液的混合溶液a，阴极池中注入化学发光底液与背景电解质溶液的混合溶液b；将过氧化物酶溶液注入阴极池中，使之催化化学发光底液反应生成激发态鲁米诺阴离子L*；酶催化反应稳定后，施加电场，使阴极池中生成的激发态鲁米诺阴离子L*与阳极池中的氢离子H+形成MRB,生成的MRB移向阳极；根据MRB移动速率与过氧化物酶活性存在的函数关系，测得过氧化物酶活性指标。本发明的方法能够有效地对过氧化物酶的各项酶学指标进行快速测定，并且无需复杂光学检测设备。 | ||
| 搜索关键词： | 测定 过氧化物 活性 电泳 滴定 方法 | ||
【主权项】：
1.一种测定过氧化物酶活性的电泳滴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：A、将芯片的通道部分灌满凝胶，阳极池中注入盐酸溶液与背景电解质溶液的混合溶液a，阴极池中注入化学发光底液与背景电解质溶液的混合溶液b；B、将过氧化物酶溶液注入阴极池中，使之催化化学发光底液反应生成激发态鲁米诺阴离子L*；C、酶催化反应稳定后，施加电场，使阴极池中生成的激发态鲁米诺阴离子L*与阳极池中的氢离子H+形成MRB， 生成的MRB移向阳极；D、根据MRB移动速率与过氧化物酶活性存在的函数关系，测得过氧化物酶活性指标；步骤D中，所述过氧化物酶活性指标包括：酶活性，酶的比活性，酶促反应速率，最大反应速率，米氏常数，催化常数；所述酶活性的计算方程式为：![]()
所述酶的比活性的计算方程式为：![]()
所述酶促反应速率计算方程式为：![]()
所述最大反应速率和米氏常数的关系式为：![]()
所述催化常数的计算方程式为：![]()
其中，上述方程式中，vL*是激发态鲁米诺阴离子的迁移速率,![]()
和![]()
分别是氢离子的浓度和迁移速率；vMRB为MRB的移动速率；Ven和Δten分别是酶催化反应体系的溶液体积和酶促反应时间；cen是阴极池中酶促反应池中的酶浓度；cL,cu是底物的瞬时浓度；[ET]是酶的浓度；Km是米氏常数。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海交通大学，未经上海交通大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201610021350.5/，转载请声明来源钻瓜专利网。
