[发明专利]用于检测人类PIK3CA基因5种突变的探针、引物及试剂盒

摘要

本发明公开了用于检测人类PIK3CA基因5种突变的探针、引物及试剂盒，其中PIM1～PIM5的5组引物和探针，每组中突变引物能与PIK3CA基因保守序列结合，突变ARMS引物能与其相应的突变序列特异性结合，扩增突变序列；检测探针能够与扩增片段结合，阻断探针能与突变位点对应的野生型序列特异性结合，抑制野生型非特异性扩增。本发明采用特异性突变引物和探针阻断技术，可准确检测PIK3CA基因5种突变类型；建立的实时荧光PCR扩增反应体系的试剂盒方便对PIK3CA基因突变的快速检测，操作简单，结果易读；检测方法灵敏度高，50拷贝突变能稳定检出；特异性好，20ng野生型基因组DNA无非特异性扩增，检测能力高达1％。

主权项

1.用于检测人类PIK3CA基因5种突变的试剂盒，其特征在于，包括用于检测人类PIK3CA基因5种突变的引物和探针，外控引物和探针，以及内控引物和探针；用于检测人类PIK3CA基因5种突变的引物和探针的核苷酸序列如下：PIM1：E542K突变突变上游ARMS引物PIM1‑F：SEQ ID NO:2，突变下游引物PIW1‑R：SEQ ID NO:1，检测探针PIW1‑P：SEQ ID NO:5，阻断探针PIW1‑B1：SEQ ID NO:6；PIM2：E545K突变突变上游ARMS引物PIM2‑F：SEQ ID NO:3，突变下游引物PIW1‑R：SEQ ID NO:1，检测探针PIW1‑P：SEQ ID NO:5，阻断探针PIW1‑B2：SEQ ID NO:7；PIM3：E545D突变突变上游ARMS引物PIM3‑F：SEQ ID NO:4，突变下游引物PIW1‑R：SEQ ID NO:1，检测探针PIW1‑P：SEQ ID NO:5，阻断探针PIW1‑B2：SEQ ID NO:7；PIM4：H1047R突变突变上游引物PIW2‑F：SEQ ID NO:8，突变下游ARMS引物PIM4‑R：SEQ ID NO:9，检测探针PIW2‑P：SEQ ID NO:11，阻断探针PIW2‑B：SEQ ID NO:12；PIM5：H1047L突变突变上游引物PIW2‑F：SEQ ID NO:8，突变下游ARMS引物PIM5‑R：SEQ ID NO:10，检测探针PIW2‑P：SEQ ID NO:11，阻断探针PIW2‑B：SEQ ID NO:12；其中，所述检测探针的核苷酸序列5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；阻断探针的核苷酸序列5’端经过双脱氧修饰，3’端标记有淬灭基团；外控引物和探针的核苷酸序列如下：外控上游引物PIR‑F：SEQ ID NO:13，外控下游引物PIR‑R：SEQ ID NO:14，外控检测探针PIR‑P：SEQ ID NO:15，外控检测探针核苷酸序列的5’端标记有FAM，3’端标记有MGB；内控引物和探针的核苷酸序列如下：内控上游引物IC‑F：SEQ ID NO:16，内控下游引物IC‑R：SEQ ID NO:17，内控检测探针IC‑P：SEQ ID NO:18，内控检测探针核苷酸序列的5’端标记有JOE，3’端标记有BHQ1。