[发明专利]褐色橘蚜基因功能验证的方法

摘要

本发明公开了一种褐色橘蚜基因功能验证的方法，包括如下步骤：1)根据要抑制的目的基因合成相应的dsRNA溶液；2)用本发明方法将dsRNA溶液导入褐色橘蚜；3)培养结束后，收集褐色橘蚜虫体提取RNA，检测步骤1中的目的基因的表达情况。本发明方法设计新颖、操作简单、基因沉默效率高，基因干扰后有明显表型变化，研究应用成本低，解决了褐色橘蚜目前没有有效的dsRNA导入方法的问题，能够稳定而且有效地对褐色橘蚜进行RNA干扰，通过RNA干扰之后观察其表型，可以对褐色橘蚜目标基因所预测功能进行验证，探索研究新的害虫控制方法，本发明方法适用范围广。

主权项

一种褐色橘蚜基因功能验证的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)准备目的基因dsRNA溶液：根据要抑制的目的基因合成相应的dsRNA溶液；2)将步骤1)中的dsRNA溶液导入褐色橘蚜，操作方法包括如下步骤：a、取离心管，将离心管的底部剪去使得底部敞口，另取PCR管将管底剪掉使得底部敞口，将PCR管的管底与离心管管盖的内壁粘在一起，使得PCR管套在离心管内；b、在PCR管中注入步骤1)制得的dsRNA溶液，将离心管管底朝上地竖立放置；c、取新鲜的柑橘嫩梢，插入PCR管中；d、将褐色橘蚜挑入离心管中，用纱网盖住离心管的管底，防止褐色橘蚜逃出离心管，然后将离心管放入培养箱中培养48‑72h。3)培养结束后，收集褐色橘蚜虫体提取RNA，检测步骤1中的目的基因的表达情况。