[发明专利]一种牦牛FOXO3基因单核苷酸多态性的检测方法及试剂盒

摘要

本发明涉及基因多态性检测技术领域，具体涉及一种牦牛FOXO3基因单核苷酸多态性的检测方法及其试剂盒，包括以下步骤：步骤一：制备牦牛FOXO3基因扩增产物；步骤二：合成高低温内标；步骤三：制备HRM‑PCR扩增产物；步骤四：收集荧光信号。本发明所设计的基因探针比现有技术中的HRM‑PCR法检测多态性位点定位更加准确、灵敏、且分型准确,不需要PCR后处理，工作效率高、重复性好对样本的质和量要求不高，同时本发明检测试剂盒敏感度高，检测快速，稳定性好，能够实现高通量检测，也能够实现低通量的检测，灵活性高，对牦牛的遗传标记育种奠定基础。

主权项

1.一种牦牛FOXO3基因单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：制备牦牛FOXO3基因扩增产物：首先提取牦牛血液基因组DNA，将其稀释后，以基因组DNA为模版，以牦牛FOXO3基因序列设计特异性引物对1、特异性引物对2、特异性引物对3和特异性引物对4，PCR扩增牦牛FOXO3基因，得到PCR扩增产物后纯化，取纯化后PCR扩增产物测序，根据测序结果鉴定牦牛FOXO3基因，并找出单核苷酸多态性位点；步骤二：合成高低温内标：通过高分辨率熔解曲线分析牦牛FOXO3基因单核苷酸多态位点的DNA探针，进行基因型分析，合成高低温内标，并对熔解曲线进行校正，所述牦牛FOXO3基因单核苷酸多态位点的DNA探针包括针对FOXO3基因98077A/G位点的探针、针对FOXO3基因98109A/G位点的探针、针对FOXO3基因98226G/C位点的探针；步骤三：制备HRM‑PCR扩增产物：取FOXO3基因的基因组DNA，加入步骤二所述的牦牛FOXO3基因单核苷酸多态位点的DNA探针，进行HRM‑PCR扩增，得到HRM‑PCR扩增产物；步骤四：收集荧光信号：将步骤二合成的高低温内标稀释，并与步骤三制备的HRM‑PCR扩增产物混合，于高分辨率熔解曲线分析系统中收集荧光信号，通过不同的荧光检测结果确定检测SNP位点处碱基突变的基因型。