[发明专利]用于使用H1启动子表达CRISPR向导RNA的组合物和方法

摘要

本公开主题提供用于使用H1启动子表达CRISPR向导RNA的组合物和方法。具体而言，提供了组合物和方法，其用于使用H1启动子来表达具有5'核苷酸的改变特异性的CRISPR向导RNA(gRNA)，以及使用H1启动子序列作为双向启动子来同时表达Cas9核酸酶和gRNA。还提供了组合物和方法，其通过使用RNA核酶和可调节的适体酶在体内表达和调节gRNA表达。

主权项

包含一种或多种载体的非天然存在的CRISPR‑Cas系统，所述载体包含：a) H1启动子，其可操作连接至编码CRISPR‑Cas系统向导RNA(gRNA)的至少一个核苷酸序列，其中所述gRNA与细胞中的DNA分子的靶序列杂交，且其中所述DNA分子编码在所述细胞中表达的一种或多种基因产物；和b) 在细胞中可操作的调节元件，其可操作连接至编码Cas9蛋白的核苷酸序列，其中组件(a)和(b)位于所述系统的相同或不同的载体上，其中所述gRNA靶向所述靶序列且与所述靶序列杂交，且所述Cas9蛋白切割所述DNA分子以改变一种或多种基因产物的表达。