[发明专利]一种驴精液冷冻保存方法

摘要

本发明公开了一种驴精液稀释液的制备和稀释方法、以及驴细管冻精的制备方法。使用方法包括以下步骤：精液稀释液的配制、采精、初次稀释、控制性降温、二次稀释、冷冻、冷冻保存。冷冻过程中采用控制性降温，适当的液氮熏蒸温度的手段，有效地提高了精子冷冻后的品质，提高了驴冷冻精液人工授精的效率。本发明提高了优良种公驴的使用效率，同时使用方法简单，适合基层推广应用。

主权项

1.一种驴精液冷冻保存方法，其特征在于，包含以下步骤：（1）环境温度控制：采精前，控制精液处理室的温度在25℃—30℃，将空离心管置于35℃水浴中预热，将载有冷冻稀释Ⅰ液的离心管置于25℃水浴中预热，将载有冷冻保存Ⅱ液的实验瓶置于4℃冰箱中；（2）精液稀释液配方如下：Ⅰ液：乳糖7g、葡萄糖1.25g,新鲜鸡蛋黄20ml、蒸馏水100ml；Ⅱ液：取Ⅰ液45ml，加入5ml甘油、青霉素钠5000UI、硫酸链霉素5000UI；（3）精液的稀释及平衡降温：采集的精液经镜检后，在580‑‑620×g离心力条件下离心10min，弃上清，留浓缩液，加入等体积（1：1）的冷冻稀释Ⅰ液，缓缓摇匀后置于盛有22℃ 100ml温水的烧杯中，再将该烧杯置于4℃冰箱中，平衡90min后，向装有精子混合液的离心管中再次添加4℃与精子浓缩液等体积的冷冻保存Ⅱ液；添加完成后缓缓摇匀，在4℃下再平衡90min；（4）精液封装及熏蒸：平衡后的精液在4℃下，用专用注射器将精子混合液吸入0.5ml细管内，快速封口，置于液氮面上2‑3cm上熏蒸6min后，直接投入液氮中冷冻。