[发明专利]一种用于治疗软骨疾病的脂质体递送系统及其制备方法

摘要

本发明属医药技术领域，为解决目前缺乏有效安全的软骨siRNA递送系统，限制RNAi在治疗软骨疾病中的应用，提供一种软骨siRNA脂质体递送系统及其制备方法。包括脂质体、脂质体修饰物和小核酸药物，脂质体为磷脂酰胆碱、胆固醇、Dlin‑KC2‑DMA；脂质体修饰物为聚乙二醇脂质共轭物，小核酸药物为Ihh siRNA。本发明修饰了脂质体纳米为基础的软骨RNA干扰递送系统，形成的复合物带有正电荷，安全、体积小能分布到全层软骨组织中。载体实验证实，能将siRNA递送入软骨细胞，成功敲除软骨细胞内的相应基因，突破了软骨组织中基因敲除的瓶颈；可作为一个靶向基因来治疗PTOA。

主权项

1.一种软骨siRNA脂质体递送组合物，包括脂质体、脂质体修饰物和小核酸药物，其特征在于：所述脂质体为磷脂酰胆碱DPPC、胆固醇、Dlin‑KC2‑DMA；所述脂质体修饰物为聚乙二醇脂质共轭物C16聚乙二醇神经酰胺，所述小核酸药物为Ihh siRNA；所述磷脂酰胆碱DPPC浓度为35mg/ml，占脂质体和脂质体修饰物的质量百分比为11.72%；胆固醇浓度为9.5mg/ml，占脂质体和脂质体修饰物的质量百分比为23.85%；聚乙二醇脂质共轭物C16聚乙二醇神经酰胺浓度为50mg/ml，占脂质体和脂质体修饰物的质量百分比为16.74%；Dlin‑KC2‑DMA的浓度为28.5mg/ml，占脂质体和脂质体修饰物的质量百分比为47.69%；制备方法包括以下步骤：（1）混合脂质体：将2µl磷脂酰胆碱DPPC、15µl胆固醇、2µl聚乙二醇脂质共轭物C16聚乙二醇神经酰胺、10µl的Dlin‑KC2‑DMA混合，然后加入乙醇将脂质体溶解，形成A液；（2）将20µM、10µl的Ihh siRNA加入55µl的柠檬酸盐缓冲液，形成B液；（3）将A液加入B液中混合均匀，形成AB混合液；（4）在AB混合液中加入400µl的PBS缓冲液洗涤，然后在超滤离心管中12000r离心5min；（5）用PBS重复洗涤离心3次，离心后所获得的80‑100µl液体即为软骨siRNA脂质体递送组合物。