[发明专利]一种鲫鱼雌核发育鱼苗的培育方法

摘要

本发明公开了一种鲫鱼雌核发育鱼苗的培育方法。首先选择性成熟的二倍体鲫亲本鱼分别收集精液和卵，通过紫外线照射Hanks液稀释过的精子使其遗传物质失活；取灭活后的精子与卵子进行人工授精，然后用冷休克法抑制减数分裂第二极体的排出，使卵子的染色体组加倍，从而培育出可以存活的鲫鱼雌核发育二倍体鱼苗。经过微卫星标记鉴定证实所有雌核发育鱼苗的遗传物质均来自母本，形态测量表明部分雌核发育鱼苗具有明显的早期生长优势。本方法具有操作简单、高效稳定、实用性强等优点。

主权项

一种鲫鱼雌核发育鱼苗的培育方法，其特征在于：包含如下步骤：(1)鲫鱼倍性鉴定利用4个微卫星标记，其座位名称为HLJY018，HLJY029，HLJY049和YJ0004，对鲫鱼群体进行染色体倍性鉴定，倍性判定方法为：基因分型结果在上述任何一个微卫星标记中出现过一次三个等位基因的鲫鱼个体即认为是三倍体鲫鱼，从未出现三个等位基因的个体则认为是二倍体鲫鱼；排除具有三个等位基因的鲫鱼个体，挑选性腺发育较好的二倍体野鲫的雌、雄个体，作为雌核发育诱导的亲本群体；微卫星标记引物如下所示：(2)精子遗传物质失活用预冷的Hanks液将来自1尾二倍体鲫鱼的精液稀释5‑8倍，调整厚度至1‑2mm，放置于冰盒上，然后放在紫外灯下17cm处照射18‑22min，且紫外线照射剂量为30‑40mW/cm2，温度保持在0‑4℃；照射过程中遮蔽自然光并置于摇床上进行，确保精子照射均匀，并用显微镜检测精子活性；(3)冷休克诱导减数分裂染色体加倍取鲫鱼卵子与步骤(2)中遗传灭活的精子混均后，加入曝气水启动人工授精过程，2‑3min后将受精卵置于5.5‑6.5℃预冷的曝气水中，冷休克处理20‑25min，然后置于常温下进行孵化；(4)雌核发育鱼苗的遗传鉴定利用微卫星标记对得到的雌核发育单倍体及雌核发育二倍体鱼苗进行分子遗传鉴定，从电泳图谱中的每个个体的扩增条带数目检测并鉴定鲫鱼雌核发育个体的染色体倍性；(5)早期生长分析将诱导得到的雌核发育二倍体鲫鱼的鱼苗置于孵化箱内进行养殖，30d后观察全部存活个体的外观表型特征并测量体重；(6)减数分裂雌核发育鱼苗的微卫星鉴定方法利用10个父母本出现特异性的微卫星标记，其座位名称为HLJY029、YJ0004、HLJY034、HLJY038、HLJY051、HLJY070、HLJY075、HLJY026、HLJY071、HLJY089，微卫星标记引物如下所示：对诱导得到的雌核发育鱼苗进行亲子鉴定，确定其是否含有父本的遗传物质，统计并分析雌核发育子代的纯合度。