[发明专利]一种鲫鱼雌核发育鱼苗的培育方法

说明书

技术领域

本发明属于鱼类遗传育种领域，特别涉及使用同源精子诱导和培育鲫鱼雌核发育鱼苗的方法。

背景技术

雌核发育是利用遗传失活的精子激活卵子，当不具有遗传信息的精子穿透入卵后，卵子能进行发育和分裂，这种遗传失活的精子的精核不与雌性原核结合，胚胎发育是靠雌核的单套染色体所携带的基因来调控的(吴清江等. 鱼类遗传育种工程. 上海:上海科学技术出版社. 1999.）。人工诱导雌核发育对鱼类性别控制、单性养殖、快速建立纯系及加速良种选育都具有重要意义，该技术已经被广泛应用于国内外许多种鱼类遗传育种的研究与实践（吴清江等. 鲤鱼人工雌核发育及其作为建立近交系新途径的研究. 遗传学报. 1981, 8:50-55；Lou et al. Diploid gynogenesis induced by hydrostatic pressure in rainbow trout, Salmo gairdneri Richardson. Journal of Fish Biology. 1984,24:665-670; 邹曙明等. 团头鲂良种雌核发育群体的建立及其遗传变异. 水产学报. 2001, 4:311-316; Sun et al. Induction of gynogenesis in Japanese Crucian carp (Carassius cuvieri). Acta Genetica Sinica. 2006, 33:405-412.）。叶小军等利用雌核发育技术得到遗传纯合度很高的大黄鱼品系（叶小军等. 大黄鱼连续两代雌核发育群体的微卫星标记分析. 水生生物学报. 2010, 34:144-151.），培育出大黄鱼“闽优1 号”；并且通过诱导雌核发育大黄鱼性反转得到生理性雄鱼，进而培育出遗传全雌大黄鱼，也已应用到生产实践。王桂兴等利用雌核发育技术和性反转技术，培育出具有生长优势的“北鲆1 号”（王桂兴等. 牙鲆连续两代减数分裂雌核发育家系的遗传特征. 中国水产科学. 2012, 19:381-389.）。

鲫鱼(Carassius auratus)属鲤形目，鲤科，鲫属，又名喜头鱼、鲋鱼、鲫拐子、朝鱼等，鲫鱼肉味鲜美，是我国名优食用鱼之一，也是传统渔业的主要增养殖对象。据中国鲤科鱼类志记载（伍献文等. 中国鲤科鱼类志. 上海:上海出版社. 1997），我国已知的鲫有2个种和1个亚种（鲫Carassius auratus、黑鲫Carassius carassius和银鲫Carassius auratus gibelio）。为了提高鲫鱼的生产效益，近年来，定向培育和遗传改良等方法培育得到的新品种层出不穷，但是这些新品种基本上都是三倍体，如人工培育的湘云鲫和其升级品种湘云鲫2号，异育银鲫和其升级品种中科3号等。我国的二倍体野生鲫鱼(Carassius auratus) 尽管肉质鲜美，但是由于其生长缓慢，人们对其关注越来越少，二倍体鲫鱼的雌核发育研究更是微乎其微。人工诱导雌核发育是加速鱼类优良基因纯合化、使优良的遗传性状得以迅速固定，从而实现快速育种的最有效方法之一。孙远东等通过人工诱导雌核发育得到的日本白鲫二倍体比普通白鲫生长更快、抗病力更强 (Sun et al. Induction of gynogenesis in Japanese Crucian carp (Carassius cuvieri). Acta Genetica Sinica. 2006, 33:405-412）。目前，关于二倍体野生鲫鱼的雌核发育的育种应用还属空白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鲫鱼雌核发育鱼苗的培育方法，并对人工诱导获得的雌核发育子代个体进行分子遗传特征和表型性状的鉴定，为实现批量制备雌核发育二倍体鲫鱼纯系群体奠定技术基础。

为了实现上述目的，本发明涉及以下技术措施：

1、鲫鱼倍性鉴定

利用4个微卫星标记，HLJY018，HLJY029，HLJY049和YJ0004，标记名称和引物序列见表1，对野生鲫鱼群体进行染色体倍性鉴定，倍性判定方法为：基因分型结果在上述任何一个微卫星标记中出现过一次三个等位基因的鲫鱼个体即认为是三倍体鲫鱼，从未出现三个等位基因的个体则认为是二倍体鲫鱼；排除具有三个等位基因的鲫鱼个体，挑选性腺发育较好的二倍体野鲫的雌、雄个体，作为雌核发育诱导的亲本群体。

2、精子遗传物质失活