[发明专利]一种制备构树体细胞胚的方法及其在构树扩繁中的应用有效
| 申请号： | 201510346965.0 | 申请日： | 2015-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN104982332B | 公开（公告）日： | 2017-02-01 |
| 发明（设计）人： | 张宗申;张朝晖;窦旖君;金朝霞;李毅;熊伟 | 申请（专利权）人： | 大连中植环境生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司11245 | 代理人： | 关畅,何叶喧 |
| 地址： | 116001 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备构树体细胞胚的方法及其在构树扩繁中的应用。本发明提供了一种制备构树体细胞胚的方法，包括如下步骤(1)将构树的胚性愈伤组织加至培养基乙中进行培养；所述培养基乙为含0.5mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸和30g/L蔗糖的1/2MS培养基；(2)完成步骤(1)后，将培养体系转接至培养基丙中进行培养；所述培养基丙为含0.5mg/L NAA、0.2mM TDZ、0.4mg/L IBA、0.4mg/L 6‑BA和30g/L蔗糖的1/2MS培养基。本发明首次完成了构树从外植体高效诱导体细胞并液体悬浮培养的整个技术体系，为大规模工厂化生产提供技术，解决了构树种苗制备繁琐和市场紧缺的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 体细胞 方法 及其 构树扩繁 中的 应用 | ||
【主权项】：
一种制备构树体细胞胚的方法，包括如下步骤：(Ⅰ)取构树无菌苗的叶片，切成0.5×0.5cm2，接种到培养基甲上，23±2℃黑暗培养25天；(Ⅱ)取步骤(Ⅰ)得到的胚性愈伤组织，接种到所述培养基甲上，23±2℃黑暗培养25天；(Ⅲ)取步骤(Ⅱ)得到的胚性愈伤组织，接种到所述培养基甲上，23±2℃黑暗培养25天；(Ⅳ)将1g步骤(Ⅲ)得到的胚性愈伤组织加至10ml培养基乙中，23±2℃、黑暗、100rpm振荡培养25天；(Ⅴ)完成步骤(Ⅳ)后，将1体积份培养体系与1体积份所述培养基乙混合，23±2℃、黑暗、100rpm振荡培养25天；(Ⅵ)完成步骤(Ⅴ)后，将1体积份培养体系与1体积份所述培养基乙混合，23±2℃、黑暗、100rpm振荡培养25天；(Ⅶ)完成步骤(Ⅵ)后，将1体积份培养体系与1体积份所述培养基乙混合，23±2℃、黑暗、100rpm振荡培养25天；(Ⅷ)完成步骤(Ⅶ)后，将1体积份培养体系与1体积份所述培养基乙混合，23±2℃、黑暗、100rpm振荡培养25天；(Ⅸ)将1体积份步骤(Ⅷ)得到的培养体系与2体积份培养基丙混合，23±2℃、12小时光照/12小时黑暗、100rpm振荡培养30天；所述培养基甲为含0.5mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸、30g/L蔗糖和5g/L琼脂粉的MS培养基；所述培养基乙为含0.5mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸和30g/L蔗糖的1/2MS培养基；所述培养基丙为含0.5mg/L NAA、0.2mM TDZ、0.4mg/L IBA、0.4mg/L 6‑BA和30g/L蔗糖的1/2MS培养基；步骤(Ⅸ)中，所述光照的条件为1500‑2000lx。
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