[发明专利]玉郎伞的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种玉郎伞的组织培养方法，包括诱导培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养，其中，诱导培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养均在固体培养基中进行。本发明利用组织培养快速繁殖技术，保留了原有品种的优良性状，且能有效且快速地增加玉郎伞的繁殖系数，不仅能满足市场对玉郎伞药材的需求，又有利于玉郎伞资源的保护。

主权项

一种玉郎伞的组织培养方法，包括获得无菌外植体、诱导培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养，所述诱导培养、所述增殖培养、所述壮苗培养和所述生根培养均在固体培养基中进行；其中，获得无菌外植体的具体步骤为：步骤一、取侧芽作为外植体，用质量分数为1％的洗洁精水溶液浸泡5‑10min，浸泡过程中用毛笔轻轻洗刷外植体表面污垢，取出外植体后用自来水冲洗15‑30min，再用无菌水润洗一次，移至超净工作台；步骤二、将所述步骤一中处理后的外植体在体积分数为75％的酒精中浸泡30‑50s后，取出外植体，并将外植体置于无菌水中，之后每隔1‑2h向无菌水中通入流量为0.1‑0.2m3/min、臭氧的浓度为4‑6mg/L的臭氧‑空气的混合气体，每次通入6‑10min，通入4‑6次后，取出外植体，并用无菌水冲洗3‑5次，最后用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，得到无菌外植体；所述诱导培养中，将无菌外植体在温度为24‑26℃，光照强度为1500lux，及光照时间为10‑12h/d的条件下培养30d，诱导不定芽萌发，以得到无菌试管苗；所述诱导培养中的固体培养基由MS，30g·L‑1蔗糖，1.5‑2.5mg·L‑1 6‑苄基腺嘌呤和5.0g·L‑1琼脂组成，并调节初始pH值为5.8；在所述诱导培养之后进行所述增殖培养，将经过所述诱导培养得到的无菌试管苗在温度为24‑26℃，光照强度为2000lux，及光照时间为10‑12h/d的条件下培养30d，得到大量不定芽；所述增殖培养中的固体培养基由MS，30g·L‑1蔗糖，0‑0.5mg·L‑1 6‑苄基腺嘌呤，0.5‑1.5mg·L‑1激动素，0.1‑0.5mg·L‑1吲哚乙酸和5.0g·L‑1琼脂组成，并调节初始pH值为5.8；在所述增殖培养之后进行所述壮苗培养，将经过所述增殖培养得到的不定芽在温度为24‑26℃，光照强度为2000lux，及光照时间为10‑12h/d的条件下培养21d，得到健壮植株；所述壮苗培养中的固体培养基由MS，30g·L‑1蔗糖，0.1‑0.5mg·L‑1 6‑苄基腺嘌呤，0.3‑0.5mg·L‑1的吲哚乙酸和5.0g·L‑1琼脂组成，并调节初始pH值为5.8；在所述壮苗培养之后进行所述生根培养，将经过所述壮苗培养得到的健壮植株在温度为24‑26℃，光照强度为2000lux，及光照时间为10‑12h/d的条件下培养21d，得到带根苗，试管苗根长为2‑4cm；所述生根培养中的固体培养基由1/2MS，30g·L‑1蔗糖，0.1‑0.5mg·L‑1吲哚乙酸，0‑1.0mg·L‑1萘乙酸和5.0g·L‑1琼脂组成，并调节初始pH值为5.8。