[发明专利]一种嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌的联合检测方法

摘要

一种嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌的联合检测方法，用碳酸盐包被液分别稀释抗嗜水气单胞菌抗体lgG1和抗产酸克雷伯氏菌抗体lgG2，加入96孔微孔板，每孔加入200μL的1％BSA，37℃封闭2h，分别用分析缓冲液稀释嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌到一定浓度，加入工作浓度的Sm³⁺-IgG1、Eu³⁺-IgG2，加入增强液，多标记分析仪上测量时间分辨荧光。本发明方法提高了检测灵敏度，缩短了分析检测时间，降低了检测成本，同时可进行定量检测，并且定量范围宽，具有极大推广使用价值。

主权项

一种嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌的联合检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)用碳酸盐包被液分别稀释抗嗜水气单胞菌抗体IgG1和抗产酸克雷伯氏菌抗体IgG2，加入96孔微孔板，洗涤；2)每孔加入200μL的1％BSA，37℃封闭2h，洗涤；3)每孔加入用分析缓冲液稀释的嗜水气单胞菌和产酸克雷伯氏菌混合菌悬液，阴性对照孔以分析缓冲液代替，37℃振荡孵育1h，洗涤；4)将工作浓度的Sm³⁺‑IgG1和Eu³⁺‑IgG2等体积混合，每孔加入100μL，25℃振荡孵育90min，洗涤；5)每孔加入200μL增强液，室温振荡15min；6)多标记分析仪上测量时间分辨荧光TRF，测量参数设置为延迟时间0.4ms，测量时间0.4ms，嗜水气单胞菌检测固定激发波长340nm，发射波长642nm，产酸克雷伯氏菌检测固定激发波长340nm，发射波长615nm；7)以样品孔的TRF值P与对照孔的TRF值N之比大于2时判断为阳性。