[发明专利]构建测序文库的方法及装置有效
| 申请号： | 201510072010.0 | 申请日： | 2015-02-11 |
| 公开（公告）号： | CN105986020B | 公开（公告）日： | 2019-08-09 |
| 发明（设计）人： | 张春燕;祝珍珍;耿春雨;章文蔚;蒋慧 | 申请（专利权）人： | 深圳华大智造科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 李志东 |
| 地址： | 518083 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供了构建测序文库的方法及装置，所述方法包括：(a)在RNA分子的3’端连接第一接头，以便获得第一连接产物；(b)在第一连接产物的5’端连接第二接头，以便获得第二连接产物；(c)对第二连接产物进行反转录，以便获得反转录产物；(d)利用一对PCR引物对反转录产物进行扩增，以便获得PCR扩增产物，其中，一对PCR引物之一含有链霉亲和素；(e)从PCR扩增产物分离单链DNA分子；以及(f)将单链DNA分子进行环化处理，以便获得环化产物，环化产物构成测序文库。该方法可有效用于RNA分子测序文库构建，操作简单、效果好，具有较高的稳定性和可重复性。 | ||
| 搜索关键词： | 构建 序文 方法 装置 | ||
【主权项】：
1.一种针对RNA分子构建测序文库的方法，其特征在于，包括：(a)在RNA分子的3’端连接第一接头，以便获得第一连接产物；(b)在所述第一连接产物的5’端连接第二接头，以便获得第二连接产物；(c)对所述第二连接产物进行反转录，以便获得反转录产物；(d)利用一对PCR引物对所述反转录产物进行扩增，以便获得PCR扩增产物，其中，所述一对PCR引物之一含有生物素；(e)从所述PCR扩增产物分离单链DNA分子；以及(f)将所述单链DNA分子进行环化处理，以便获得环化产物，所述环化产物构成所述测序文库；步骤(a)和(b)是在相同容器中进行的，其中，在步骤(a)中采用过量的所述第一接头，并且在进行步骤(b)之前，向步骤(a)所得到的反应产物中添加特异性识别所述第一接头的屏蔽序列，以便对剩余的所述第一接头进行屏蔽处理。
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