[发明专利]一种用于测定碱性磷酸酶活性的电化学方法

摘要

本发明提供了一种用于测定碱性磷酸酶活性的电化学方法及该方法中所使用的电化学传感器。所述方法包括：制备半胱氨酸和铜离子修饰的电极；绘制特定浓度的焦磷酸根离子底物下，碱性磷酸酶的酶活浓度与相对电流强度的标准曲线；将已知酶活浓度的碱性磷酸酶溶液换成含碱性磷酸酶的待测样品，进行循环伏安扫描，得到相对电流强度，根据所述标准曲线计算得到待测样品中碱性磷酸酶的活性浓度。本发明利用半胱氨酸、焦磷酸根离子与铜离子可逆竞争配位原理，制备了用于测定碱性磷酸酶活性的电化学传感器，利用所述电化学传感器能够对碱性磷酸酶活性进行快速、简单、准确测定。

主权项

一种用于测定碱性磷酸酶活性的电化学方法，包括下述步骤：1)制备半胱氨酸和铜离子修饰的电极；2)将所述半胱氨酸和铜离子修饰的电极放置于磷酸缓冲溶液中进行循环伏安扫描，稳定后，加入焦磷酸根离子溶液和碱性磷酸酶溶液，搅拌均匀得到具有特定焦磷酸根离子浓度和已知酶活浓度的检测溶液，作用一段时间后，进行循环伏安扫描，记录测得的相对电流强度，依此方法，测得一系列检测溶液的一系列已知酶活浓度对应的一系列的相对电流强度值，绘制在所述特定浓度的焦磷酸根离子底物作用下，碱性磷酸酶的酶活浓度与测得的相对电流强度的标准曲线，并进行非线性拟合，得到拟合方程；3)将所述半胱氨酸和铜离子修饰的电极放置于磷酸缓冲溶液中进行循环伏安扫描，稳定后，加入焦磷酸根离子溶液和含有碱性磷酸酶的待测样品，搅拌均匀得到含待测样品的检测溶液，所述含待测样品的检测溶液中的焦磷酸根离子浓度与步骤2)中检测溶液中的焦磷酸根离子浓度相等，作用与步骤2)中的作用时间相等的时间后，进行循环伏安扫描，记录测得的相对电流强度，将所述相对电流强度带入步骤2)得到的拟合方程中，经计算得到待测样品中碱性磷酸酶的活性浓度。