[发明专利]片段缩合制备特利加压素的方法

摘要

本发明公开了一种特利加压素的片段缩合方法，固相制备特利加压素的全保护第一肽片段序列树脂，环化形成二硫键，然后将环化的全保护第一肽片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护第一肽片段序列与H‑Gly‑NH2缩合得到环化的全保护第二肽片段序列；液相或者固相制备特利加压素的第三肽片段序列；环化的全保护第二肽片段序列脱氨基端保护后与第三肽片段序列缩合，然后脱去所有保护基得到特利加压素粗品，纯化转盐得到产品醋酸特利加压素；第一肽片段序列为特利加压素序列中的第4‑11位氨基酸，第二肽片段序列为特利加压素序列中的第4‑12位氨基酸，第三肽片段序列为特利加压素序列中的第1‑3位氨基酸。

主权项

一种特利加压素的片段缩合方法，其特征在于，固相制备特利加压素的全保护第一肽片段序列树脂，在固相中使用I2氧化两个半胱氨酸形成二硫键，然后将环化的全保护第一肽片段序列从树脂上裂解下来；液相中环化的全保护第一肽片段序列与H‑Gly‑NH2缩合得到环化的全保护第二肽片段序列；液相或者固相制备特利加压素的第三肽片段序列；环化的全保护第二肽片段序列脱氨基端保护后与第三肽片段序列缩合，然后脱去所有保护基得到特利加压素粗品，纯化转盐得到产品醋酸特利加压素；第一肽片段序列为特利加压素序列中的第4‑11位氨基酸，第二肽片段序列为特利加压素序列中的第4‑12位氨基酸，第三肽片段序列为特利加压素序列中的第1‑3位氨基酸；具体包括如下步骤：a.固相制备特利加压素的全保护第一肽片段序列树脂；所述的全保护第一肽片段序列为：Fmoc‑Cys(R1)‑Tyr(tBu)‑Phe‑Gln(Trt)‑Asn(Trt)‑Cys(R1)‑Pro‑Lys(Boc)‑OH，其中，R1为Trt或者Acm；使用I2氧化全保护第一肽片段序列树脂，使得第4和第9位的半胱氨酸形成二硫键，得到环化的全保护第一肽片段序列树脂；将环化的全保护第一肽片段序列从固相树脂上裂解；b.将步骤a得到的环化的全保护第一肽片段序列与H‑Gly‑NH2缩合得到环化的全保护第二肽片段序列；c.液相或者固相合成特利加压素的第三肽片段序列，所述的第三肽片段序列为：R2‑Gly‑Gly‑Gly‑OH，其中R2为Boc或者Fmoc；d.脱除步骤b得到的环化的全保护第二肽片段序列的氨基端保护基，然后与步骤c得到的第三肽片段序列缩合得到全保护特利加压素；e.将全保护特利加压素裂解脱去所有保护基得到特利加压素粗品；f.特利加压素粗品经纯化转盐得到醋酸特利加压素；步骤a中，全保护第一肽片段序列树脂是由氨基酸依次偶联在固相树脂上获得的，其中，所述的固相树脂为2‑氯‑三苯甲基氯树脂；固相制备特利加压素全保护第一肽片段序列树脂的过程中，所使用的氨基脱保护试剂为体积百分含量为20％的哌啶的DMF溶液、或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液；所用的偶联剂为HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者DIC与HOBt的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；使用的二硫键氧化剂为I2，二硫键与I2摩尔比为1∶5～10，溶剂为DMF或者DCM；使用的裂解剂为体积百分含量为0.5～1％的TFA的DCM溶液、体积百分含量为20％的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1∶2∶7的混合物；步骤b中，缩合反应使用的缩合剂为HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA的组合、或者EDC与HOBt的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；缩合反应的溶剂为DMF、DCM、NMP和DMSO中的任意一种或几种的组合；步骤c中，液相合成Boc‑Gly‑Gly‑Gly‑OH的方法是，首先Boc‑Gly‑OH与H‑Gly‑OMe反应得到Boc‑Gly‑Gly‑OMe，脱去Boc保护后与Boc‑Gly‑OH反应得到Boc‑Gly‑Gly‑Gly‑OMe，皂化得到Boc‑Gly‑Gly‑Gly‑OH；液相合成Fmoc‑Gly‑Gly‑Gly‑OH的方法是，首先Fmoc‑Gly‑OH与H‑Gly‑OtBu反应得到Fmoc‑Gly‑Gly‑OtBu，脱去Fmoc保护后与Fmoc‑Gly‑OH反应得到Fmoc‑Gly‑Gly‑Gly‑OtBu，然后TFA∶DCM按体积比1∶1反应，得到Fmoc‑Gly‑Gly‑Gly‑OH；固相合成R2‑Gly‑Gly‑Gly‑OH的方法是，Fmoc‑Gly‑OH与2‑氯‑三苯甲基氯树脂反应得到肽树脂，脱去Fmoc保护后与Fmoc‑Gly‑OH反应得到二肽树脂，再脱去Fmoc保护后与R2‑Gly‑OH反应得到三肽树脂；用裂解剂将R2‑Gly‑Gly‑Gly‑OH从固相树脂上裂解，得到R2‑Gly‑Gly‑Gly‑OH，其中，所述的裂解剂为体积百分含量为0.5～1％的TFA的DCM溶液、体积百分含量为20％的TFE的DCM溶液、或者TFE与AcOH与DCM按照体积比1∶2∶7的混合物；步骤d中，氨基脱保护为体积百分含量16％的哌啶的DMF溶液，或者体积百分含量为1％的DBU的DMF溶液；缩合反应使用的缩合剂为HBTU与HOBt与DIEA的组合、或者HBTU与HOAt与DIEA的组合、或者EDC与HOBt的组合、或者PyBOP与HOBt与DIEA的组合；缩合反应使用的反应溶剂为DMF、DCM、NMP和DMSO中的任意一种或几种的组合。