[发明专利]一种恒河猴外周血单核巨噬细胞的培养方法及其应用

摘要

本发明涉及恒河猴外周血单核巨噬细胞的培养方法，具体为分离外周血单个核细胞，收集的外周血单个核细胞用PBS重悬、洗涤2次，洗过的细胞经离心回收，每次1200rpm离心8min，最后用含2%-4%猴自体血清、1%青链霉素和1‰HEPES的RPMI1640培养液重悬，重悬的细胞的密度在3×10⁶个细胞/ml，立即加入到CELLBINDSurface的96孔培养板，0.8×10⁶个细胞/孔，或48孔培养板，3×10⁶个细胞/孔中培养，24h后将未贴壁细胞用RPMI1640培养液洗弃，之后用含2%-4%猴自体血清的完全培养基继续培养贴壁的细胞，以后每2~3天换一次培养液，7天后观察细胞形态，判定细胞分化结果。分化培养得到的恒河猴单核巨噬细胞纯度高，具有典型巨噬细胞形态学和免疫学特性。该方法简单、经济、有效。

主权项

一种恒河猴外周血单核巨噬细胞培养方法，其特征在于，包括如下步骤：A、分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）；B、培养收集的PBMCs：收集的PBMCs用PBS重悬、洗涤2次，洗过的细胞经离心回收，每次1200 rpm离心8 min，最后用含2%‑4%猴自体血清、1%青链霉素和1‰HEPES的RPMI 1640培养液重悬，重悬的细胞的密度在3×10⁶个细胞/ml，立即加入到CELLBIND Surface的96孔培养板，0.8×10⁶个细胞/孔，或48孔培养板，3×10⁶个细胞/孔中培养，24h后将未贴壁细胞用RPMI 1640培养液洗弃，之后用含2%‑4%猴自体血清的完全培养基继续培养贴壁的细胞，以后每2~3天换一次培养液，7天后观察细胞形态，判定细胞分化结果；C、培养细胞鉴定：包括细胞形态学观察、用流式细胞仪检测细胞表面CD14表达水平、细菌脂多糖刺激后巨噬细胞特异性细胞因子的表达检测。