[发明专利]一种水蓑衣愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法

摘要

本发明研究了一种水蓑衣愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养等步骤。本发明方法可以大规模培养水蓑衣细胞，生产次生代谢物，克服化学方法合成不经济、受自然条件和人为条件影响等缺点，操作简单，生长周期短，增殖率高。

主权项

 一种水蓑衣愈伤组织和悬浮细胞的快速繁殖方法，包括无菌叶片的获得、愈伤组织的诱导、愈伤组织的增殖、悬浮细胞的培养等，主要步骤如下：（1）取水蓑衣的幼嫩叶片，按照常规的消毒方法对其进行消毒处理；（2）将步骤（1）灭菌处理过的水蓑衣叶片接入培养基配方为改良MS+KT0.5mg/L+2，4‑D2.0mg/L+硫代硫酸钠100mg/L培养基中进行愈伤组织诱导培养，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，PH5.8，光强1000lx，温度23℃，湿度70%‑80%；（3）将步骤（2）诱导出来的愈伤组织接入培养基配方为MS+KT0.2mg/L+2，4‑D0.2mg/L+叶酸0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂0.6%的增殖培养基中培养，PH5.8，光强1500lx，温度23℃，湿度70%‑80%；（4）取步骤（3）增殖后分散性好的愈伤组织放入液体培养基MS+2，4‑D0.2‑0.3mg/L+KT0.4‑0.6mg/L+5‑6mg/L苯丙氨酸中进行振荡培养，附加蔗糖30g/L，每100ml三角瓶接种30ml液体悬浮细胞，PH5.8，光照2000lx，温度25℃，20天后称重，检测次生代谢物含量。