[发明专利]基于磁性分离和多色量子点标记的抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体快速共检的方法和试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于磁性分离和多色量子点标记的抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体快速共检的方法和试剂盒，该试剂盒由具有富集抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体功能的抗卡他莫拉菌抗体捕获纳米磁珠、多色量子点分别标记的抗人IgM、IgG抗体纳米探针、质控品以及PBST缓冲液所组成；质控品包括阳性质控品以及阴性质控品；阳性质控品为卡他莫拉菌感染者的抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体分别为阳性的血清；阴性质控品是抗卡他莫拉菌IgM、IgG均为阴性的人血清。本发明具有简便、快速、高灵敏度的优点,可实现对抗卡他莫拉菌IgM、IgG的同步检测。

主权项

一种基于磁性分离和多色量子点标记的抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体快速共检的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)重组卡他莫拉菌膜蛋白抗原UspA1的制备；2)将步骤1)制备得到的重组卡他莫拉菌膜蛋白抗原UspA1与纳米磁珠通过共价偶联，制得抗卡他莫拉菌抗体捕获纳米磁珠；3)将鼠抗人IgM单克隆抗体与发射波长为520nm的纳米量子点通过共价偶联，制备量子点标记的抗人IgM纳米探针；将鼠抗人IgG单克隆抗体与发射波长为600nm的纳米量子点通过共价偶联，制备量子点标记的抗人IgG纳米探针；将量子点标记的抗人IgM纳米探针与量子点标记的抗人IgG纳米探针等量混合即制得多色量子点分别标记的抗人IgM、IgG纳米探针；4)取人血清样本，用PBSA缓冲液适当稀释后，分别向血清稀释液中加入步骤2)制备得到的抗卡他莫拉菌抗体捕获纳米磁珠以及步骤3)制备得到的多色量子点分别标记的抗人IgM、IgG纳米探针，充分混合，反应5‑45min后进行磁分离，以PBST缓冲液洗涤2遍后，使用荧光酶标仪，在发射波长分别为520nm及600nm下分别读取荧光值；所述PBSA缓冲液中各组分含量分别为8g/L NaCL，0.2g/LKCl，0.24g/L KH2PO4，1.44g/L Na2HPO4，5g/L BSA，所述PBSA缓冲液的pH＝7.4；所述PBST缓冲液中各组分含量分别为8g/L NaCL，0.2g/L KCl，0.24g/L KH2PO4，1.44g/L Na2HPO4，5g/L BSA，0.3g/L NaN3，0.5ml/L Tween‑20，所述PBST缓冲液的pH＝7.4；5)根据步骤4)的方法检测至少30份经临床各种方法均确定为抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体均为阴性的人血清样本，分别读取发射波长分别为520nm及600nm下的荧光值；所述抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体均为阴性的人血清样本简称卡他莫拉菌抗体阴性对照样品；所述卡他莫拉菌抗体阴性对照样品在发射波长为520nm的荧光值的平均值与3倍标准差之和记为CUT‑OFF1值；所述卡他莫拉菌抗体阴性对照样品在发射波长为600nm的荧光值的平均值与3倍标准差之和记为CUT‑OFF2值；若步骤4)中人血清样本在发射波长为520nm的检测荧光值大于CUT‑OFF1值，则判断为人血清样本中抗卡他莫拉菌IgM抗体为阳性；若步骤4)中人血清样本在发射波长为520nm的检测荧光值小于CUT‑OFF1值，则判断为人血清样本中抗卡他莫拉菌IgM抗体为阴性；若步骤4)中人血清样本在发射波长为600nm的检测荧光值大于CUT‑OFF2值，则判断为人血清样本中抗卡他莫拉菌IgG抗体为阳性；若步骤4)中人血清样本在发射波长为600nm的检测荧光值小于CUT‑OFF2值，则判断为人血清样本中抗卡他莫拉菌IgG抗体为阴性。