[发明专利]基于磁性分离和多色量子点标记的抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体快速共检的方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，具体为一种基于磁性分离和多色量子点标记的抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体快速共检的检测方法及检测试剂盒，以及该检测试剂盒的制备及使用方法。

背景技术

卡他莫拉菌(Moraxella catarrhalis，Mc)首次发现于1896年，当时称之为卡他微球菌(Micrococcus catarrhalis)，尔后又称为卡他奈瑟菌(Neisseria catarrhalis)和卡他布兰汉菌(Branhamella catarrhalis)。卡他莫拉菌为革兰氏阴性球菌,通常呈肾形双球菌状，偶可呈四联状，无鞭毛，无芽胞，一般无荚膜。其营养要求不高，普通培养基上即可生长，需氧，最适生长温度为35℃。菌落直径1～3mm，光滑型，灰白色，不透明，整个菌落易从培养基上刮下。较长时间培养后，菌落可呈粗糙颗粒状，黏附在培养基表面。产氧化酶和DNA酶。对糖类均不发酵。抵抗力较强，在痰中可存活27d，65℃时可存活30min。

过去一直认为Mc是对人体无致病性的上呼吸道正常寄居菌，但是，近20多年的研究发现，该菌不仅可以引起儿童和老年人的上呼吸道感染，而且还是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌，是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常见致病菌，仅次于肺炎支原体和肺炎链球菌。已有报道该菌可引起呼吸道医院感染爆发流行。因此，卡他莫拉菌及其所致感染日益受到人们关注，对该菌的生物学特性、流行病学、所致疾病、耐药性以及感染的防治有了更多的认识。

临床上由于Mc与其他呼吸道病原体引起的感染症状类似，因此常难以根据临床表现、x-射线检查等得出结论，确诊往往依赖于实验室诊断。而儿童疾病的特点是起病急、转归快，因此敏感、快速、实用的Mc检测对及早进行有效的临床干预具有非常重要的意义。

在卡他莫拉菌感染的实验室诊断上，被检者血清中抗卡他莫拉菌抗体指标则是诊断结果的重要依据之一。

免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)和免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)是人体内最重要的两种抗体。当卡他莫拉菌进入机体后，最早出现的免疫球蛋白是IgM抗体，之后出现IgG，通过检测体内特异性IgM、IgG抗体的存在，可诊断人体对卡他莫拉菌的免疫反应状态。若检测出特异性IgM抗体，表明有近期感染的发生，但IgM抗体半衰期较短，IgM的检测阴性并不能证明机体未受感染，还需要检测半衰期较长，含量最高的IgG抗体，以明确诊断。

目前，血清中特异性IgM及IgG抗体的检测方法主要有冷凝集实验、明胶颗粒凝集实验、酶联免疫吸附实验、金标免疫斑点法及金标免疫层析法。冷凝集实验的特异度和敏感度均为最低，因此其临床诊断价值不大；金标免疫斑点法及金标免疫层析法虽操作简便快捷，但敏感度略低，对抗体水平较低的患者有漏诊的可能；明胶凝集实验试剂准备与操作过程较为繁琐，且需要专业操作人员。酶联免疫吸附法具有特异、敏感等优点，已用于检查各种抗体或抗原，但此方法存在以下问题：(1)每一批试验从加样、温浴、洗版等步骤较多，操作繁琐，时间较长(总共需要2-4小时)；(2)检测中需分别加入显色成分A液与B液，且还要在规定时间内完成读数，一定程度上增加了劳动强度和操作失误的可能性；(3)该法无法做到对IgM及IgG两种抗体的同时检测。虽然单独检测IgM和IgG抗体后，再综合分析检测结果对疾病的诊断并无影响，但操作过程繁琐，检测不够方便快捷，检测成本较共检亦会增加。

因此，建立具备高灵敏度的能对抗卡他莫拉菌的特异性IgM、IgG抗体进行快速同步共检的检测方法显得十分必要。

发明内容

针对背景技术中存在的这些技术问题，本发明提供了一种基于磁性分离和多色量子点标记的能简便、快速、高灵敏度的同步共检抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体的检测方法和试剂盒，以及该试剂盒的制备及使用方法。

本发明是通过以下技术方案来实现的：

一种基于磁性分离和多色量子点标记的抗卡他莫拉菌IgM、IgG抗体快速共检的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)重组卡他莫拉菌膜蛋白抗原UspA1的制备；

2)将步骤1)制备得到的重组卡他莫拉菌膜蛋白抗原UspA1与纳米磁珠通过共价偶联，制得抗卡他莫拉菌抗体捕获纳米磁珠；