[发明专利]一种依诺肝素钠的生产方法

摘要

本发明公开了一种依诺肝素钠的生产方法，所述方法首先将肝素钠酶解后，进行HPLC分析，采用峰面积归一化法计算各个峰的含量，根据肝素钠酶解后的二糖和四糖的标准图谱，确定待测肝素钠酶解后二糖和四糖的种类，并与标准图谱的二糖和四糖的含量进行比较，选择符合标准要求的肝素钠原料进行依诺肝素钠的生产。本发明简单有效，不仅能够保证产品的安全性有效性，而且从源头控制依诺肝素钠的质量，能够避免肝素钠原料药的浪费，大大节约了成本，提高了生产效率。

主权项

一种依诺肝素钠的生产方法，其特征在于其包括如下步骤：1)肝素钠酶解：将肝素钠原料配制成水溶液，向其加入含有肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ和肝素酶Ⅲ的混合肝素酶溶液，进行酶解64～72小时，制成肝素钠酶解溶液；其中混合肝素酶溶液中各肝素酶的含量比为肝素酶Ⅰ：肝素酶Ⅱ：肝素酶Ⅲ＝1:0.6:0.2；2)分离分析：将所述肝素钠酶解溶液注入HPLC中进行检测，记录色谱图，根据肝素钠的二糖和四糖的保留时间，确定待测肝素钠中的二糖和四糖的种类，并计算待测肝素钠酶解后10个二糖和2个四糖的含量；其中检测条件为：色谱柱为季铵型强阴离子交换色谱柱，检测器为紫外检测器，检测波长为220～240nm，使用流动相A和流动相B梯度洗脱，所述流动相A为磷酸二氢钠溶液，所述流动相B为磷酸二氢钠和高氯酸钠的混合溶液；3)原料药筛选：选取酶解后二糖和四糖的含量符合下述要求的待测肝素钠作为依诺肝素钠原料；其中二糖和四糖色谱峰的峰面积分别在1.8％～3.7％、≤1.0％、1.8％～3.6％、2.3％～4.4％、1.1％～2.1％、≤3.9％、8.4％～11.9％、4.0％～8.8％、1.1％～2.0％、≤1.0％、52.4％～66.9％、1.6％～3.4％范围内；4)生产依诺肝素钠：以步骤3)中选取的肝素钠为原料，经过季铵盐化、酯化和氧化反应，得到依诺肝素钠。