[发明专利]一种大黄药材的检测方法

摘要

本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种大黄药材的检测方法，该检测方法包括土大黄苷的鉴别、没食子酸和儿茶素的含量测定和农药残留量检测。本发明不仅检测的准确度高，方法简单、快速，而且可一次性将大黄药材中常见的农药种类进行一次性的有效检测，可同时完成多个检测指标，更有利于对大黄药材质量的控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。

主权项

一种大黄药材的检测方法，其特征在于，该检测方法包括如下有效成分的鉴别及含量测定步骤以及农药残留量检测的步骤，其中，A、土大黄苷的鉴别包括以下步骤：(1)取土大黄苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.3mg土大黄苷的溶液，作为对照品溶液；(2)另取待测药材粉末0.5g，加甲醇15mL，加热回流、放冷并滤过，滤液作为供试品溶液；(3)照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比100：30：2：3的三氯甲烷‑甲醇‑甲酸‑水为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；B、没食子酸和儿茶素的含量测定包括以下步骤：(1)精密称取没食子酸与儿茶素对照品适量，用50％甲醇溶解，制成含没食子酸0.106mg/mL与儿茶素0.115mg/mL的混合对照；(2)精密称取待测药材细粉0.5g，置锥形瓶中，精密加入25mL20％甲醇溶液，超声40分钟，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试溶液；(3)照高效液相色谱法试验，以waters C18柱为色谱柱，以甲醇为流动相A，以体积浓度0.1％的磷酸为流动相B，控制流速1mL/分钟进行梯度洗脱，具体梯度洗脱程序如下：从0‑10分钟，流动相A：流动相B的体积比为8％：92％；从10‑30分钟，流动相A：流动相B的体积比由8％：92％→30％：70％；从30‑35分钟，流动相A：流动相B的体积比由30％：70％→40％：60％；从35‑40分钟，流动相A：流动相B的体积比由40％：60％→8％：92％；从40‑50分钟，流动相A：流动相B的体积比为8％：92％；精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，于280nm波长下测定；C、农药残留量检测包括以下步骤：(1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1mL含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；分别精密量取各农药对照品贮备溶液1mL及所述内标贮备液1mL，加丙酮定容至100mL，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20‑1000ng/mL的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1mL含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1mL含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1mL混匀，加乙腈定容至10mL，作为分析保护剂；(2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100mL，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；随后精密量取上述溶液60mL减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷‑乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10mL，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷‑乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯‑丙酮混合溶液5mL溶解，并转移至石墨碳‑氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯‑丙酮混合溶液15mL洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μL，加乙腈定容至1mL，作为供试品溶液；(3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400μL，并分别加入所述分析保护剂100μL混匀，随后分别精密吸取1μL，进行气相色谱‑质谱联用仪测定；其中，所述气相色谱分析条件为：取规格为30m×0.25mm×0.25um的弹性石英毛细管柱DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1.3mL/分钟，进样量1μL，采用高压不分流进样，设置进样口温度为230℃，升温程序具体为：初始温度60℃，以30℃/分钟升至120℃、以10℃/分钟升至200℃、以2℃/分钟升至230℃、以30℃/分钟升至300℃，并保持7分钟；所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。