[发明专利]莱克多巴胺半抗原和抗原的制备方法及其在量子点免疫荧光试剂盒中的应用

摘要

本发明公开了一种莱克多巴胺半抗原，相应的人工抗原和量子点标记的抗体，同时本发明也公开了所述莱克多巴胺半抗原，相应的人工抗原和量子点标记抗体的制备方法及其应用。本发明提供的莱克多巴胺半抗原与载体蛋白连接可以得到莱克多巴胺抗原。所述莱克多巴胺抗原可应用于制备莱克多巴胺特异性抗体。本发明还保护一种用于检测莱克多巴胺的量子点免疫荧光试剂盒。本发明提供的试剂盒操作简便、特异性好、灵敏度高，各项性能优良，非常适于推广应用。

主权项

一种用于检测莱克多巴胺的量子点免疫荧光试剂盒，包括量子点标记的特异性抗体；所述抗体是通过以式Ⅰ所示的化合物与载体蛋白的偶联物为免疫原得到的；式Ⅰ；所述式Ⅰ所示的化合物的制备方法是由如下步骤制得而成：取500mg莱克多巴胺，溶于45ml甲醇中，加入348.8mg 6‑溴己酸和233mg氢氧化钾，加热至80℃回流反应40~72小时，点板确定原料大部分转化；减压浓缩：使用15ml复溶，使用制备薄层色谱板分离纯化，展开剂DCM:ME=4:1，以莱克多巴胺标准定位，取比其极性大的点，使用甲醇提取，浓缩即得RAC‑BBAR，得到的干物质即为半抗原；所述式Ⅰ所示化合物与载体蛋白结合的偶联物的制备方法包括如下步骤：取RAC‑BHAR半抗原160mg溶于10.7mlDMF中，搅拌使之充分溶解，加入EDC 221.75mg和NHS 191.4mg，室温反应3h；称取144.1mg BSA溶于15ml 0.1M 碳酸缓冲溶液，pH=9.6，中，搅拌10min，充分溶解；将步骤1的活化液3.6ml，在冰水浴环境下逐滴加入到蛋白溶液中，边加边搅拌，室温400rpm磁力搅拌反应24h；将反应产物装入一个蒸馏水冲洗干净的15cm透析袋，1L 1×，pH7.2 PB室温100rpm搅拌透析3d，每天换液3次，共计换液9次，将透析产物4500rpm离心6min，0.5ml/管分装，将抗原编号，‑20℃保存备用；所述量子点标记的特异性抗体是通过如下方法制备获得的：①取2.5mg量子点，用pH4.7、0.1M的MES缓冲液洗涤，然后用1ml pH4.7、0.1M的MES缓冲液重悬，加入0.96mg EDC和1.15mg NHS，37℃反应30分钟，20000rpm离心5min，收集沉淀，即为活化后的量子点；②取步骤①得到的活化后的量子点，用pH8.5、50mM的硼砂缓冲液洗涤，然后将2.5mg活化后量子点、所述蛋白质含量为0.15mg的抗体和pH8.5、50mM的硼砂缓冲液混匀，总体积为0.8ml，25℃反应3.5小时；③取完成步骤②的液相，加入BSA并使其质量百分含量为5%，37℃反应30分钟，20000rpm离心5min，收集沉淀，用pH7.4、0.02M的PBS缓冲液洗涤，用1ml pH7.4、0.02M的PBS缓冲液重悬；④取步骤③得到的液相，用pH7.4、0.02M的PBS缓冲液稀释至150000倍体积。