[发明专利]莱克多巴胺半抗原和抗原的制备方法及其在量子点免疫荧光试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种半抗原、抗原及其制备方法和应用，具体涉及一种莱克多巴胺半抗原和抗原的制备方法及其在量子点免疫荧光试剂盒中的应用，用于检测动物组织和尿液中的莱克多巴胺残留量，属于免疫学检测领域。

背景技术

莱克多巴胺是一种医药原料，具有广泛的生理效应，可用于治疗充血性心力衰竭症的强心药，且常用于支气管哮喘、支气管痉挛和产科疾病的治疗。当其用量增加到临床用量的5-10倍时，可增加肌肉生长，减少脂肪蓄积，是良好的营养分配剂和生长促进剂。美国FDA在2000年批准，可以用于动物营养重新配剂，广泛地用于畜牧业和养殖业。可以同时提高动物的日增重，提高饲料利用率，提高动物的蛋白质含量。但是其在动物体内的残留一旦经食物链进入人体，会对食用者产生巨大危害，特别对心脏病、糖尿病、高血压、甲亢、青光眼、前列腺肥大等病人危害更大，甚至死亡，如瘦肉精（莱克多巴胺是“瘦肉精药物”中的一种）在上海曾经引发几百人的中毒事件；在台湾由于从美国进口的猪肉里含有瘦肉精，几乎挑起一场政治争端。目前我国禁止将β-激动剂等药物作为动物促生长剂使用。但长期以来，各种因非法使用β-激动剂而造成的中毒事件时有发生。为打击非法用药，保护消费者的健康与安全，迫切需要健全相关的检测方法。

目前，兽药残留检测常用的方法有气相色谱、高效液相色谱以及气质联用等理化分析方法。虽然这些方法特异性强、灵敏度高，但是样品前处理操作步骤繁琐，成本较高，也不适用于大批量样品的筛选检测。免疫化学分析鉴于在抗原抗体的定性定量方面独特的优势和操作简便快速、成本低、灵敏度较高、分析样本量大的优点弥补了理化分析的不足，在莱克多巴胺的残留检测中起着越来越重要的作用。

影响免疫化学分析质量的根本因素是抗体的特异性与亲和性，这些性质又决定于免疫半抗原分子的结构，因此免疫半抗原的分子设计与合成是产生特异性抗体和建立小分子兽药残留快速检测技术的最基础和最关键的步骤。

发明内容

本发明的目的是提供一种莱克多巴胺半抗原和抗原的制备方法及其在量子点免疫荧光试剂盒中的应用。

本发明提供的莱克多巴胺半抗原，为式（Ⅰ）所示的化合物；

式（Ⅰ）。

本发明还公开了式Ⅰ所示化合物的制备方法，包括如下步骤：

1、取500mg莱克多巴胺，溶于45ml甲醇中，加入348.8mg 6-溴己酸和233mg氢氧化钾，加热至80℃回流反应40~72小时。点板确定原料大部分转化。

2、减压浓缩。使用15ml复溶，使用制备薄层色谱板分离纯化，展开剂DCM:ME=4:1，以莱克多巴胺标准定位，取比其极性大的点，使用甲醇提取，浓缩即得RAC-BBAR。

本发明提供的莱克多巴胺抗原，是将式Ⅰ所示化合物和载体蛋白偶联得到的偶联物。

常用载体蛋白均可采用，如牛血清白蛋白（BSA），卵清蛋白（OVA），人血清白蛋白（HSA），鼠血清白蛋白（MSA），甲状腺蛋白（TG）或血蓝蛋白（KLH）等。

所述式Ⅰ所示化合物与BSA偶联得到的莱克多巴胺抗原的结构见式Ⅱ：

本发明还公开了所述莱克多巴胺抗原的制备方法，包括如下步骤：

1、取RAC-BHAR半抗原160mg溶于10.7mlDMF中，搅拌使之充分溶解。加入EDC 221.75mg和NHS 191.4mg，室温反应3h。

2、称取144.1mg BSA溶于15ml 0.1M 碳酸缓冲溶液（pH=9.6）中，搅拌10min，充分溶解。

3、将步骤1的活化液3.6ml，在冰水浴环境下逐滴加入到蛋白溶液中，边加边搅拌，室温磁力搅拌（400rpm）反应24h。

4、将反应产物装入一个蒸馏水冲洗干净的透析袋（15cm），1L PB（1×，pH7.2）室温搅拌（100rpm）透析3d，每天换液3次（早中晚各一次），共计换液9次，将透析产物4500rpm离心6min，0.5ml/管分装，将抗原编号，-20℃保存备用。

OVA代替BSA，同法制备可得包被原。

所述莱克多巴胺抗原可以作为免疫原制备莱克多巴胺特异性抗体，也可以作为包被原制备微孔板。

应用莱克多巴胺抗原制备得到的特异性抗体具体可为单克隆抗体或多克隆抗体。

所述莱克多巴胺抗原、所述特异性抗体均可应用于检测莱克多巴胺。

本发明还保护一种用于检测莱克多巴胺的量子点免疫荧光试剂盒，包括量子点标记的所述抗体。