[发明专利]一种黄毛藜豆的组培快繁方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种黄毛藜豆的组培快繁方法，该方法包括黄毛藜豆外植体的采集与消毒；黄毛藜豆丛生芽的诱导与增殖；黄毛藜豆壮苗生根培养；黄毛藜豆的炼苗与移栽。本发明可有效解决黄毛藜豆种子不易收集，且在自然条件下种子发芽率低等问题，可满足现代农业发展过程中建设生态胶园、油棕园、果园套种豆科绿肥对种苗日益增长的市场需求。

主权项

一种黄毛藜豆的组培快繁方法，其特征在于，它包括以下步骤：1）黄毛藜豆外植体的采集与消毒：采集黄毛藜豆成熟、健康的种子，用清水洗净后置于超净工作台上，先用体积百分比浓度70%～75%乙醇处理20～40s，无菌水冲洗4～5遍后用0.05 %～0.15 %的HgCl2水溶液浸泡灭菌10～20min，再用无菌水冲洗4～5遍，无菌滤纸吸干表面水分，用手术刀在种背部轻轻划出一道小口，接种到附加30g/L蔗糖、6.5g/L琼脂，pH为5.8，且已在温度121℃、压力1.1 kg·cm‑2的条件下灭菌20 min的MS培养基上；接种后放在温度为27℃±1℃，光源为日光灯，光照度为2000～3000 lx，光照时间为12h·d‑ 1的条件下进行培养；2）黄毛藜豆丛生芽的诱导与增殖：种子经过3～5d的培养后胚根伸出，10～12 d 后，上胚轴伸长，两片子叶逐渐展开，分别将子叶展开而第一片真叶尚未展开的无菌幼苗的子叶节切下后接种到已在温度121℃、压力1.1 kg·cm‑2的条件下灭菌20 min的诱导丛生芽培养基中，接种后放在温度为27℃±1℃，光源为日光灯，光照度为2 000～3000 lx ，光照时间为12 h·d‑ 1的条件下进行培养；其中，该培养基配方为：MS+ NAA 0.05mg / L+ 6‑BA 1.5 mg / L，附加30g/L蔗糖和6.5g/L琼脂，该培养基pH为5.8，其中MS为基本培养基； 3）黄毛藜豆壮苗生根培养：选择健壮的、植株高度在5～8cm的单个丛生芽，切下后接种到已在温度121 ℃、压力1.1 kg·cm‑2的条件下灭菌20 min的壮苗生根培养基中，接种后的丛生芽小植株放在温度为27℃±1℃，光源为日光灯，光照度为2 000～3 000 lx ，光照时间为12 h·d‑ 1的条件下进行培养；其中，该培养基配方为：1/2 MS+ NAA 0.5 mg/ L，附加30g/L蔗糖和6.5g/L琼脂，该培养基pH为5.8，其中1/2MS为基本培养基；4）黄毛藜豆的炼苗与移栽：取培养30～50 d，根系发达，植株高为10～15 cm的黄毛藜豆组培苗，预先室内进行开盖炼苗3 d，洗净根部附着的培养基，放入0.05～0.15%多菌灵水溶液中浸泡消毒10～20 min后，移栽到预先消毒处理过的沙床中，浇水淋透，适当保湿遮荫。