[发明专利]一种基于高分辨率熔解曲线的多SNP鉴定方法有效
| 申请号： | 201410349635.2 | 申请日： | 2014-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN104131092A | 公开（公告）日： | 2014-11-05 |
| 发明（设计）人： | 郭涛;罗文龙;王加峰;黄翠红;周丹华;陈志强;王慧 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林丽明 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明属于农业生物技术领域，具体公开一种基于高分辨率熔解曲线的多SNP鉴定方法。本发明针对目前SNP鉴定的局限性，将多重PCR、巢式PCR、等位特异性PCR相结合，提出基于高分辨率熔解曲线的多SNP鉴定方法。本方法利用多重PCR实现2~4个基因片段扩增，提高实验效率，降低实验成本；利用巢式PCR提高扩增片段特异性，获得高质量、浓度均一的DNA模板，提高HRM技术稳定性；利用等位特异性PCR，实现SNP位点判别，避免荧光标记的设定或繁琐的电泳及酶切操作；通过上述方法的综合运用，实现多个SNP的批量鉴定、降低实验成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 高分辨率 熔解 曲线 snp 鉴定 方法 | ||
【主权项】：
一种基于高分辨率熔解曲线的多SNP鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.样品DNA提取；S2.针对待测基因，设计一对扩增SNP位点的外引物；S3.以样品DNA为模板，加入外引物，构建PCR反应体系，进行第一轮扩增；S4.第一轮扩增产物进行稀释，分装至编号为A、B的PCR管；S5.针对SNP位点，设计由3’段碱基错配的引物搭配构成的内引物对1和内引物对2；S6.在A管中加入内引物对1，在B管中加入内引物对2，构建PCR反应体系，进行第二轮扩增；S7.第二轮扩增产物进行高分辨率熔解曲线分析，判定SNP类型。
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