[发明专利]一种制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法

摘要

本发明公开了一种制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法，具体包括样品前期处理、样品戊二醛、锇酸固定、样品PBS清洗和丙酮梯度脱水、环氧树脂包埋剂浸渍置换包埋、丙酮清洗与聚合与样品镀膜，即完成寄生虫扫描电镜样品制备。本发明的优点在于：1)寄生虫样品固定前处理易于保持寄生虫正常形态，减少样品的丢失；2）用1％的锇酸再次固定，将寄生虫熏成黑色，即可发挥再次固定的作用，同时将寄生虫固定成易肉眼观察的黑色，便于后续的操作；本发明通过环氧树脂包埋剂梯度浸渍置换包埋替代传统的干燥步骤，因环氧树脂聚合后硬度大，内部稳固支撑寄生虫整体结构，能长期保存，并能更加逼真的展示原始形态特征。

主权项

一种制备扫描电镜用寄生虫样品的环氧树脂包埋方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，样品前期处理：将寄生虫活体迅速杀死后包裹于定性滤纸中； 步骤二，样品固定：将样品置于戊二醛中固定2～4小时，然后使用PBS缓冲液将样品表面清洗干净，除去戊二醛，再用锇酸固定，将寄生虫熏成黑色；步骤三，样品清洗和梯度脱水：使用PBS缓冲液将样品表面清洗干净，除去锇酸，然后用体积浓度为30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、100％、100％、100％的丙酮作梯度脱水；步骤四，置换：寄生虫脱水后采用环氧树脂包埋剂与丙酮的混合液中浸渍包埋；步骤五，清洗：将环氧树脂包埋剂浸渍后的寄生虫挑出放到网眼小于寄生虫体的筛网上，在70℃条件下聚合3～5小时，自然冷却至室温后用丙酮清洗，直到线虫表面变为无光泽为止，再在70℃条件下聚合12～24小时；步骤六，样品镀膜：将聚合好的样品台用离子溅射仪喷金90 ~ 120s，在寄生虫样品表面均匀镀上一层导电的金膜，即完成寄生虫扫描电镜样品的制备。