[发明专利]基于铂纳米粒子催化电化学循环信号放大技术测定DNA的电化学传感器和测定DNA的方法

摘要

本发明涉及基于铂纳米粒子催化电化学循环信号放大技术测定DNA的电化学传感器的制备方法及其应用，将发卡DNA1自组装在铂纳米粒子修饰金电极表面，当有目标物DNA2存在时，由于目标物DNA2与组装在金电极表面表面上的发卡DNA1部分互补配对，打开DNA1的发卡结构；然后另外一条发卡DNA3链通过竞争配对杂交取代目标链DNA2，目标链DNA2被释放下来，释放的目标链则继续打开新的发卡结构，如此的循环作用实现了目标链DNA2的循环使用，结合制备的纳米粒子电化学探针实现信号的放大，再利用制备好的电化学传感器催化PAP与PQI之间的循环，实现了电化学信号的进一步放大，利用环伏安法或DPV测定电流信号强度，根据测得电流信号强度，实现对目标链DNA2测定。本发明的传感器具有高的检测灵敏度。

主权项

基于铂纳米粒子催化电化学循环信号放大技术测定DNA的电化学传感器的制备方法，其特征包括以下步骤： (1)制备铂纳米粒子修饰金电极：取金电极经0.2μm，0.03μm和0.05μm的α‑A1₂O₃抛光粉抛光后，用二次蒸馏水冲洗干净，然后在超声波水浴中超声5min，用高纯氮气吹干；取5～20μL制备的PtNPs滴涂在金电极表面，置于避光处自然晾干，用二次水冲洗电极，得铂纳米粒子修饰的金电极(PtNPs/GE)； (2)DNA的预处理:进行发卡DNA的预处理，取一定量的0.1～10μM的巯基DNA1(或DNA3)于2mL离心管中，置于95℃恒温水浴槽中加热5min，取出后立即置于冰水中冷却1min即得到发卡DNA1； (3)制备电化学传感器：取5～30μL经过预处理的发卡DNA1滴涂在PtNPs/GE表面，4℃下使其自组装反应24h；接着取10μL100μM的巯基已醇封闭，得电化学传感器； 其中：所述的铂纳米粒子制备包括以下步骤：把合成要用到的玻璃仪器如容量瓶、棕色广口瓶、圆底烧瓶等用王水(HCl：HNO₃＝1:3)浸泡洗净，用二次水冲洗烘干后备用；在100mL圆底烧瓶中加入50mL，0.1～50mM的HPtCl₆，并在搅拌下加热至沸腾，然后快速加入5mL的38.8mM的柠檬酸钠(Na₃C₆H₅O₇)，此时溶液由黄色变为棕色；再加热10min，搅拌30min，冷却至室温，即得铂纳米粒子(PtNPs)，转移至棕色瓶中，并放于4℃温度下储存备用。