[发明专利]纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法

摘要

本发明属于中药活性成分提取生产工艺领域，具体涉及一种响应面分析优化纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖方法及最佳提取工艺条件。本发明采用纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖，用纤维素酶法热水浸提、灭活酶、浓缩、醇沉、脱蛋白、醇沉、脱色素、醇沉、提取率测定等步骤，即按照1：8～12料液比和添加2％左右的纤维素酶热水浸提两次，80％醇沉三次，三氯乙酸脱蛋白两次，活性炭吸附脱色两次。本发明由响应面三维图获得白花蛇舌草多糖最佳提取工艺条件为：PH7左右、温度55℃、纤维素酶用量2％，在此条件下白花蛇舌草多糖提取率为9.83％。

主权项

一种纤维素酶法提取白花蛇舌草多糖的工艺方法，其特征在于：按照白花蛇舌草与水重量比1：8～12的料液比配制提取液，在提取液中添加纤维素酶热水浸提，80％醇沉，脱蛋白，脱色素，最后精制而成；具体按如下步骤进行：(1)热水浸提：将白花蛇舌草进行粉碎，过40目筛，按1：8～12重量比的料液比加入水配制成白花蛇舌草提取液；用磷酸缓冲液调节pH为7，加入1.5～2.5％的纤维素酶，混匀，55℃水浴搅拌加热提取60分钟，抽滤得滤液；将滤渣按1：8～12重量比的料液比加入水，用磷酸缓冲液调节pH为7，再加入1.5～2.5％的纤维素酶，混匀，55℃水浴搅拌加热提取60分钟再提取一次，抽滤得滤液，合并两次滤液，对滤液进行90℃灭活酶10分钟；(2)浓缩：将滤液真空旋转减压浓缩至浓度为含生药0.5～1克/毫升，放至室温；(3)第一次醇沉：在浓缩液中加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24～48小时；抽滤，得白花蛇舌草粗多糖；(4)脱蛋白：将白花蛇舌草粗多糖加适量水溶解，加等体积5％的三氯乙酸，边加边搅拌，静置60分钟，3000rmp离心5分钟，取上清液，再重复以上操作进行第二次脱蛋白，得脱蛋白多糖溶液；(5)第二次醇沉：在脱蛋白后的白花蛇舌草多糖液中加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24～48小时；抽滤，用无水乙醇洗涤2‑3次，真空干燥，得白花蛇舌草多糖；(6)脱色素：将白花蛇舌草多糖用适量水溶解，加入重量1％的活性炭，混匀，加热至80℃温度搅拌30分钟，过滤，收取滤液；将滤液加入重量1％的活性炭，混匀，加热至80℃温度搅拌30分钟，过滤，得脱色素白花蛇舌草多糖溶液；(7)第三次醇沉：将脱色素白花蛇舌草多糖液加入95％乙醇至醇浓度为80％，边加边搅拌，密封盖严，静置24小时；抽滤，用无水乙醇洗涤2‑3次，真空干燥，得精制白花蛇舌草多糖。