[发明专利]适度表达新型枯草芽孢杆菌NADH氧化酶高效发酵生产乙偶姻

摘要

适度表达新型枯草芽孢杆菌NADH氧化酶高效发酵生产乙偶姻，属于基因工程和发酵工程领域。本发明通过本实验室自主筛选的具有独立知识产权的高产乙偶姻菌株B.subtilis JNA基因组中首次发现新型NADH氧化酶，在确定该酶酶学性质的同时，通过适度表达载体pMA5-P_bdhA，将NADH氧化酶在bdhA基因缺失型枯草芽孢杆菌中进行表达，最终利用代谢工程改造后的重组菌发酵生产乙偶姻，获得约56.7g/L乙偶姻和1.2g/L2，3-丁二醇，2，3-丁二醇、乳酸和乙酸分别减少约92.3％、70.1％和75.0％，乙偶姻生产效率上升到0.68g/(L·h)，较原始菌株发酵周期缩短1.7倍。为国内外首次在枯草芽孢杆菌中利用NADH调控生产乙偶姻，实现了缩短发酵周期、减少NADH依赖型副产物的目的。

主权项

一种bdhA基因缺失型枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，其特征在于：从pBGSC6质粒上克隆得到cat基因的完整表达基因片段，利用碱性磷酸酶处理该基因片段并与经过同样处理后的T‑bdhA连接，构建SEQ ID NO：1所示的因报告基因插入而失活的bdhA基因片段，然后将构建好的T‑bdhA：：cat转化至保藏编号为CCTCC NO：M209309的枯草芽孢杆菌B.subtilis JNA中，筛选获得一种bdhA基因缺失型枯草芽孢杆菌。