[发明专利]同时检测副流感病毒1至4型、冠状病毒229E和鼻病毒的试剂盒及病原体检测方法

摘要

本发明提供了一种可同时检测副流感病毒1至4型、冠状病毒229E和鼻病毒的试剂盒，包括各病原体的特异性引物、各病原体的基因探针。本发明的上述可同时检测副流感病毒1至4型、冠状病毒229E和鼻病毒的试剂盒，基于多重荧光实时PCR和Tem-PCR技术之上，采用特异性设计的病原体引物和病原体基因探针，进行RT-PCR，可以大大提高了扩增效率，从而用普通的TaqDNA聚合酶仍能使检测结果具有很高的检测灵敏度，解决了传统多重PCR扩增效率低和检测灵敏度低的问题。

主权项

一种可同时检测副流感病毒1至4型、冠状病毒229E和鼻病毒的试剂盒，其特征在于，包括病原体特异性引物和病原体基因探针；其中，所述病原体特异性引物包括：副流感病毒1型上游引物5’‑GAGATCTCACACAATTAATAGAGAAGTCA‑3’；副流感病毒1型下游引物5’‑CCTACGGGACATCTCCAGAA‑3’；副流感病毒2型上游引物5’‑ACCTAAGTGATGGAATCAATCGC‑3’；副流感病毒2型下游引物5’‑TGCCCTGTTGTATTTGGAAGAGAT‑3’；副流感病毒3型上游引物5’‑TGTTGAGCCTATTTGATACATTTAAGC‑3’；副流感病毒3型下游引物5’‑ATGATAGCTCCACCAGCTGATTTT‑3’；副流感病毒4型上游引物5’‑CCTGGAGTCCCATCAAAAGT‑3’；副流感病毒4型下游引物5’‑GCATCTATACGAACACCTGCT‑3’；冠状病毒229E上游引物5’‑ATGGCTACAGTCAAATGGGC‑3’；冠状病毒229E下游引物5’‑CACTATCAACAAGCAAAGGGCTATAA‑3’；鼻病毒上游引物5’‑TGGACAGGGTGTAAAGAGC‑3’；鼻病毒下游引物5’‑GCATCTATACGAACACCTGCT‑3’；所述病原体基因探针包括：副流感病毒1型基因探针5’‑AAT TGG CTC AGA TAT GCG A(G/A)A ACA C‑3’；副流感病毒2型基因探针5’‑TGT TCA GTC ACT GCT ATA CCA GGA G‑3’；副流感病毒3型基因探针5’‑CGT AGG CAA GAA AAC ATA A‑3’；副流感病毒4型基因探针5’‑ACAATTACACTTGA“T”CCGTTAGCAAGACCCAT‑3’；冠状病毒229E基因探针5’‑CAC AAC GTG GTC GTC AGG GTA GAA TA‑3’；鼻病毒基因探针5’‑TCC TCC GGC CCC TGA ATG‑3’。