[发明专利]Hedgehog信号通路过表达转基因家蚕细胞系及所用重组转座载体

摘要

本发明公开了一种重组转座载体PXL-BACⅡ-ZsGFP-BmU6-Hh-Neo^r的构建方法，包括以下步骤：1)设计家蚕Hedgehog基因扩增引物；2)克隆Hedgehog基因：以纯种P50家蚕为材料，提取总RNA；反转录合成得到cDNA；再以此cDNA为模板，PCR合成Hedgehog基因；PCR产物直接连接到pMD18-T载体上，测序确认；3)构建Hh基因过表达重组转座载体PXL-BACⅡ-ZsGFP-BmU6-Hh-Neo^r。本发明采用RT-PCR方法合成家蚕Hedgehog基因，测序后构建转座载体，并通过转座载体插入家蚕细胞的基因组，获得Hedgehog信号传导通路过表达的转基因家蚕细胞系，用于研究Hedgehog基因功能。

主权项

重组转座载体PXL‑BACⅡ‑ZsGFP‑BmU6‑Hh‑Neo^r的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1)、设计家蚕Hedgehog基因扩增引物；2)、克隆Hedgehog基因：以纯种P50家蚕为材料，提取总RNA；反转录合成得到cDNA；再以此cDNA为模板，PCR合成Hedgehog基因；PCR产物直接连接到pMD18‑T载体上，测序确认；3)、构建Hh基因过表达重组转座载体PXL‑BACⅡ‑ZsGFP‑BmU6‑Hh‑Neo^r。