[发明专利]识别微丝菌用荧光探针的制备方法

摘要

本发明提供一种识别微丝菌用荧光探针的制备方法，该方法先采用卤代长碳链化合物对咔唑吡啶苯乙烯类菁染料的4-甲基吡啶部分进行修饰，而后再与3-甲酰基-N-乙基咔唑反应合成具有长疏水链的荧光探针。本发明效果为，该探针制备过程中将咔唑吡啶苯乙烯类菁染料的制备和修饰同步化，制备方法简单，制得的荧光探针背景干扰小，荧光强度高，荧光性质稳定。利用微丝菌具有疏水表面这一特性，本申请中所制备的具有长疏水链的荧光探针可与其结合，从而达到荧光识别微丝菌的目的。

主权项

一种识别微丝菌用荧光探针的制备方法，该方法是采取将咔唑吡啶苯乙烯类菁染料的合成和修饰同步化的合成路线，先引入卤代长碳链化合物对其4‑甲基吡啶部分进行修饰，而后再与3‑甲酰基‑N‑乙基咔唑部分反应，制得具有长疏水链的荧光探针，包括以下步骤：(1)长链烷基‑4‑甲基吡啶卤化盐的合成在圆底烧瓶中分别加入0.8‑1.5份4‑甲基吡啶，0.7‑1.3份卤代长碳链化合物及28份甲苯，磁力搅拌充分溶解进行反应，反应温度为120℃，待反应完成后，冷却至室温，去除上层甲苯得到油状物，并用正己烷洗涤，最后将洗涤完的油状物在旋转蒸发仪中进行减压蒸馏，得到长链烷基‑4‑甲基吡啶卤化盐；(2)3‑甲酰基‑N‑乙基咔唑的合成在圆底烧瓶中加入三氯氧磷20份，在冰水浴冷却搅拌条件下，向圆底烧瓶中依次滴加DMF19‑22份，65份含3‑3.5份N‑乙基咔唑的1,2‑二氯乙烷溶液，滴毕，回流反应8h，反应液冷却至室温，并倒入冰水中，搅拌，用二氯甲烷萃取，在旋转蒸发仪中进行减压蒸馏后，经柱层析分离得3‑甲酰基‑N‑乙基咔唑；(3)荧光探针的合成将步骤(1)中制备的长链烷基‑4‑甲基吡啶卤化盐溶于70份无水乙醇中，并加入0.9‑1.3份步骤(2)中制备的3‑甲酰基‑N‑乙基咔唑，滴加3‑5滴哌啶，回流反应12h,得到红色溶液，反应液浓缩后，加入乙醚析出沉淀，抽滤，制得滤饼，将滤饼在甲醇中重新结晶，得具有长疏水链的荧光探针。