[发明专利]一种快速筛选抗菌活性细菌和放线菌的方法

摘要

本发明涉及了一种快速筛选抗菌活性细菌和放线菌的方法，其步骤包括（1）样品采集；（2）培养基制备；（3）细菌和放线菌分离；（4）截取吸头的制备；（5）抗菌活性菌株筛选。本发明提方法通过共培养的方式快速地筛选抗菌活性细菌和放线菌，与纯种培养筛选抗菌活性细菌和放线菌相比，可以增加新颖抗菌活性菌株及抗菌活性物质的几率，并且整个筛选过程快速，操作简单，劳动强度较小，能够快速、直观、高效的筛选到抗菌活性的细菌和放线菌，为抗菌活性细菌和放线菌的筛选研究提供了极大方便。

主权项

一种筛选抗菌活性细菌和放线菌的方法，其特征在于，其步骤如下：(1)样品采集：用无菌取样瓶采集海水、海泥、土壤或者河水样品，迅速送至实验室；(2)培养基制备：2216E培养基：蛋白胨5g，酵母膏1g，FePO4 0.1g，陈海水1000ml；高氏一号培养基：可溶性淀粉20.0g，KNO3 1.0g,K2HPO4 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g.NaCl0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，蒸馏水1000ml，pH7.2；营养琼脂培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，蒸馏水1000ml，pH7.2；PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，蒸馏水1000ml，自然pH；若上述培养基为固体培养基，添加琼脂20g/L；除2216E培养基外，若用于海洋样品菌株的分离，则培养基中蒸馏水用海水代替；(3)细菌和放线菌的分离：将所取样品进行梯度稀释，取50μL不同稀释度的稀释液分别涂布于添加终浓度为50mg/ml的重铬酸钾溶液的平板用于细菌和放线菌的分离；海洋样品的细菌和放线菌用2216E平板和海水配制的高氏一号平板；陆源样品的细菌和放线菌用营养琼脂平板和高氏一号平板；30℃倒置培养，细菌培养2‑7d，放线菌培养7‑14d，根据菌落特征和革兰氏染色显微镜观察后判断不同菌种；(4)截取吸头的制备：取1ml移液器吸头，以宽口端为准，截取12mm，其余部分锯掉，边缘打磨光滑，121℃灭菌20min；(5)抗菌活性菌株的筛选：从斜面中挑取Escherichia coli保存菌种，在厚度为3mm的营养琼脂培养基平板上三区划线，37℃倒置培养至出现单菌落；超净台内用无菌截取吸头在单菌落对应点上方打孔，并使培养基保留在吸头内；用此吸头的另一端在稀释涂布分离的细菌或放线菌的单菌落上打孔，并用无菌镊子轻压吸头内的培养基，使吸头内上下两端的培养基接触，即Escherichia coli和待筛选的细菌或放线菌形成共培养；将此共培养微生物的截取吸头置于Staphylococcus aureus、Escherichia coli、Saccharomyces cerevisiae、Penicillium expansum含菌指示平板，指示细菌培养采用营养琼脂培养基，真菌培养采用PDA培养基；于指示菌适合的温度培养后观察，并用游标卡尺测定抑菌圈的大小；抑菌圈越大，菌株抗菌活性越强；从而筛选得到抗菌活性细菌和放线菌。