[发明专利]土壤中抗生素抗性基因的定量检测方法

摘要

本发明公开了一种土壤中抗生素抗性基因的定量检测方法，包括以下步骤：1)选用经常服用抗生素的猪，以猪粪DNA为模板，采用PCR扩增目的抗性基因片段；2)切胶回收纯化扩增后的目的抗性基因，将抗性基因连接在T载体上，然后转化感受态大肠杆菌细胞，涂LB平板后挑选阳性克隆子；3)用琼脂糖凝胶电泳检测扩大培养菌液的质量，选克隆成功的菌液提取质粒，检测质粒浓度，换算出质粒所携带抗性基因的拷贝数，并按10倍为稀释梯度稀释备用，作为抗性基因标准品；4)提取土壤的基因组DNA，将土壤样品DNA和抗性基因标准品同时进行定量PCR扩增，从而最终得出土壤样品的抗性基因的拷贝数。

主权项

土壤中抗生素抗性基因的定量检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)、选用经常服用抗生素的猪；提取上述猪的猪粪的基因组DNA，并以猪粪DNA为模板，采用PCR扩增目的抗性基因片段；2)、切胶回收纯化扩增后的目的抗性基因，将抗性基因连接在T载体上，然后转化感受态大肠杆菌细胞，涂LB平板后挑选阳性克隆子，用LB培养液培养；3)、用琼脂糖凝胶电泳检测扩大培养菌液的质量，选克隆成功的菌液提取质粒，检测质粒浓度，换算出质粒所携带抗性基因的拷贝数，并按10倍为稀释梯度稀释备用，作为抗性基因标准品；4)、提取土壤的基因组DNA，将土壤样品DNA和抗性基因标准品同时进行定量PCR扩增，根据抗性基因标准品的拷贝数和其扩增的CT值生成标准曲线，进而得出土壤样品的抗性基因的拷贝数。