[发明专利]一种制备艾塞那肽的方法

摘要

本发明涉及一种制备艾塞那肽的方法，解决了现有技术存在的成本高，收率低，杂质（des‑Glu15,Glu16‑艾塞那肽）含量较大，不适合规模化生产的问题。本发明的具体步骤为A）以氨基树脂为起始树脂，通过Fmoc固相合成法，按照艾塞那肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中，肽序15‑17的氨基酸偶联反应中，溶液DMF中添加其体积20 %的2,2,2‑三氟乙醇和1.5 mol/L的尿素；B）肽树脂裂解后，第一次纯化采用反相填料，第二次纯化采用阴离子树脂，脱盐后可以使杂质des‑Glu15,Glu16‑艾塞那肽含量降低到0.1 %以下，冻干，得到艾塞那肽。本发明提供了一种成本低、纯度高，适合规模化生产的艾塞那肽的制备工艺，此工艺既能有效控制des‑Glu15,Glu16‑艾塞那肽含量又不影响艾塞那肽的收率。

主权项

一种制备艾塞那肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：步骤1，以氨基树脂为起始树脂，通过Fmoc固相合成法，按照艾塞那肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中，肽序15‑17的氨基酸偶联反应中，溶液DMF中添加其体积20％的2,2,2‑三氟乙醇和1.5mol/L的尿素；步骤2，肽树脂裂解后，1)第一次纯化采用C18柱纯化，纯化条件：流动相为：A相：0.1％TFA；B相：乙腈；梯度程序为：15％B，60min内至60％B；检测波长220nm；收集目的峰馏分；2)第二次纯化采用阴离子树脂，用UniDEAE‑10阴离子交换柱；流动相：A为10mmol/L醋酸铵水溶液用稀氨水调节其pH值为7.30±0.20的缓冲液:乙腈＝90:10；B为10mmol/L醋酸铵+100mmol/L氯化钠水溶液用醋酸调节其pH值为4.50±0.20的缓冲液:乙腈＝90:10；梯度程序为：100％A，60min内至100％B；检测波长为220nm；收集目的峰馏分；3)脱盐条件：流动相：A相：20mmol/L乙酸铵的水溶液:乙腈＝95:5；B相：水:乙腈＝95:5；C相：0.03％醋酸的水溶液:乙腈＝95:5；D相：0.03％醋酸的水溶液:乙腈＝50:50；梯度程序为：以流动相A等梯度洗脱15分钟，转换成流动相B等梯度洗脱10分钟,转换成流动相C等梯度洗脱10分钟,转换成流动相D等梯度洗脱25分钟；检测波长220nm；收集目的峰馏分；冻干，得到艾塞那肽。