[发明专利]抗圆斑蝰蛇毒素和抗五步蛇毒素抗体的制备方法

摘要

本发明涉及一种抗圆斑蝰蛇毒素和抗五步蛇毒素抗体，其特征在于，由一份高效价抗圆斑蝰蛇毒素抗体和一份高效价抗五步蛇毒素抗体混合而成，所述的抗圆斑蝰蛇毒素抗体是采用圆斑蝰蛇毒素经灭活而成的圆斑蝰蛇毒素抗原免疫母鸡产生的鸡卵黄IgY抗体，所述的抗五步蛇毒素抗体是采用五步蛇毒素经灭活而成的五步蛇毒素抗原免疫母鸡产生的鸡卵黄IgY抗体。本发明能保护人和动物在蝰蛇或五步蛇咬伤时免受圆斑蝰蛇毒素或五步蛇毒素的伤害，特异性高，反应灵敏，成本低，适于大规模推广应用。本发明还提供了上述抗圆斑蝰蛇毒素和抗五步蛇毒素抗体的制备方法和应用，其制备方法过程简单，应用广泛，十分具有实用性。

主权项

一种抗圆斑蝰蛇毒素和抗五步蛇毒素抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：进行抗原制备：进行圆斑蝰蛇毒素抗原制备，采集圆斑蝰蛇毒素，立即加入0.08‑0.12M苯甲基磺酰氟，使所述的苯甲基磺酰氟与所述的圆斑蝰蛇毒素形成最终浓度为0.8‑1.2mM的1毫升蛇毒溶液；然后加入乙二胺四乙酸溶液，使其中的乙二胺四乙酸浓度在0.8‑1.5mM范围内，加入碘乙酰胺溶液，使所述的蛇毒溶液和所述的碘乙酰胺溶液充分搅拌混匀，使其中的碘乙酰胺浓度为100‑200mM范围内，避光培育；反应完成后，超滤，洗脱除去残存的苯甲基磺酰氟、碘乙酰胺、乙二胺四乙酸等小分子物质并浓缩，灭活脱毒后制得所述的圆斑蝰蛇毒素抗原；进行五步蛇毒素抗原制备：采集五步蛇毒素，用PBS稀释，然后加入甲醛，放置，灭活蛇毒制得所述的五步蛇毒素抗原；步骤二：免疫母鸡：将制得的所述的圆斑蝰蛇毒素抗原和所述的五步蛇毒素抗原分别免疫母鸡，分别收集圆斑蝰蛇毒素抗原免疫母鸡所下鸡蛋与五步蛇毒素抗原免疫母鸡所下鸡蛋；步骤三：提取抗体：分别分离圆斑蝰蛇毒素抗原免疫母鸡所下鸡蛋与五步蛇毒素抗原免疫母鸡所下鸡蛋中的鸡蛋黄，采用水溶法和离子交换方法分别提取IgY抗体，从而分别得到抗圆斑蝰蛇毒素抗体和抗五步蛇毒素抗体；步骤四：将所述的抗圆斑蝰蛇毒素抗体和所述的抗五步蛇毒素抗体按1:1比例混合成所述的抗圆斑蝰蛇毒素和抗五步蛇毒素抗体。