[发明专利]一种羊肚菌优质菌种的生产工艺

摘要

一种羊肚菌优质菌种的生产工艺，包括羊肚菌的采集时间、优质菌株的筛选、菌丝的培养、母种的制作及培养、栽培种的制作及培养。于种植羊肚菌第二年的2月～3月，第一茬或第二茬羊肚菌出菇后的第7～10天，10cm≤羊肚菌个体长度≤15cm，菌盖饱满，菌盖上棱和凹坑完全展开,菌柄为乳白色时采集，优质菌株的筛选采用菌盖形态及颜色筛选、菌柄颜色及形态筛选、孢子颜色及数量筛选、菌核生成能力筛选四级逐级淘汰筛选。本发明生产的羊肚菌优质菌种连续三年鲜菇产量平稳，稳定在80kg左右，出菇时间稳定、个体生长速度相接近，解决了目前羊肚菌产业化发展中产量不稳定的技术问题。

主权项

一种羊肚菌优质菌种的生产工艺，包括以下步骤：（1）羊肚菌的采集时间于种植羊肚菌第二年的2月～3月，第一茬或第二茬羊肚菌出菇后的第7～10天，10cm≤羊肚菌个体长度≤15cm，菌盖饱满，菌盖上棱和凹坑完全展开, 菌柄为乳白色时采集无病虫害的羊肚菌菌株； （2）优质菌株的筛选，按如下四级进行逐级淘汰筛选：①菌盖形态及颜色筛选菌盖长度≥4 cm、2 cm≤菌盖最宽处的宽度≤5cm、菌盖颜色为黑色或黄褐色的  为一级，其余为二级，淘汰第二级；②菌柄颜色及形态筛选将步骤（2）①未淘汰的菌株先进行菌柄颜色的比较，菌柄颜色为乳白色的为初选一级；菌柄颜色为白色或黄褐色的为初选二级，淘汰初选二级；再将菌柄颜色为乳白色的初选一级菌株进行菌柄形态的比较，其中无病害、菌柄最窄处的宽度≥1.5cm的为一级，其余为二级，淘汰第二级；③孢子颜色及数量筛选A. 孢子的收集，将洁净的A₄纸折成信封状，取下步骤（2）②未淘汰的羊肚菌的菌盖并去掉菌盖上的泥土，然后将菌盖的顶部朝下放入信封中，封好，放在阳光下晒2～3天，得到羊肚菌孢子印，刮取孢子印得到孢子，孢子颜色为黄色的为一级孢子，孢子颜色为白色的为二级，淘汰第二级；B. 将一级孢子放入10ml无菌水的试管中，摇匀，配成孢子母悬液，取1ml孢子母悬液加入100ml的无菌水试管中，摇匀得第一次稀释孢子悬液，取第一次稀释孢子悬液1ml加入100ml的无菌水试管中，摇匀得第二次稀释孢子悬液，取第二次稀释孢子悬液1ml加入100ml的无菌水试管中，摇匀得第三次稀释孢子悬液，取第三次稀释孢子悬液1ml放在载玻片上，在显微镜下进行孢子计数，孢子个数≥10²个的为一级，孢子个数＜10²个的为二级，淘汰第二级；  ④菌核生成能力筛选无菌条件下，挑取步骤（2）③B未淘汰的羊肚菌的菌株孢子放入10ml无菌水中，摇匀得到孢子母悬液，取孢子母悬液1ml放入100ml无菌水中，摇匀得到孢子悬液，此时取1ml的孢子悬液放入PDA培养基中，用灭菌的涂布棒进行涂布，25℃暗培养，待长出菌落时，挑取一个单菌落再接入PDA培养基中，25℃暗培养，此时得到单孢子菌丝，长满平皿后，取1.0cm×1.0cm菌块接入PDA培养基中，25℃条件下培养，观察记录菌丝生长速度，菌核生成时间及菌核生成数量，菌丝生长速度≥6.4mm/d、菌核数量≥40个、菌核生成时间≤7d且菌丝长满半径r=45mm的平皿的菌株为一级，其余为二级，淘汰第二级，得到的一级菌株即为羊肚菌优质菌株；（3）菌丝的培养将PDA培养基高压灭菌后，冷却到50‑60℃，在无菌条件下，取15ml PDA培养基倒入平板中冷却凝固后，备用；用接种针挑取步骤（2）④获得的羊肚菌优质菌株对应的孢子放入10ml无菌水中，摇匀，得到孢子母悬液，取孢子母悬液1ml放入100ml无菌水中，摇匀得到孢子悬液，此时取1ml的孢子悬液放入PDA培养基中，用灭菌的涂布棒进行涂布，25℃暗培养，待长出菌落时，挑取一个单菌落再接入PDA培养基中，25℃暗培养，待长满平皿后备用；（4）母种的制作及培养①母种培养基的配制：将浸泡48小时的小麦煮熟后捞出，在煮熟的小麦中加入蔗糖和麦麸，蔗糖的加入量为煮熟的小麦质量的0.1%，麦麸的加入量为煮熟的小麦质量的0.2%，拌匀并控制含水量为30%即得母种培养基；②母种的制作及培养，将配制的母种培养基装入300ml的聚丙烯培养瓶中，装入的母种培养基量为聚丙烯培养瓶体积的2/3，再将聚丙烯培养瓶在126℃，压力0.15Mpa的条件下灭菌1h后冷至室温；在无菌条件下，每聚丙烯培养瓶接入1cm×1cm的步骤（3）培养的菌丝后，置于25℃培养箱中，在100 lx光照下培养，待菌丝长满聚丙烯培养瓶后，转入15℃培养箱中暗培养10～15d；（5）栽培种的制作及培养①栽培种培养基的配制：以质量分数计，用木屑为78%，麦麸为20%，蔗糖为1%，石灰为0.1%，磷酸二氢钾为0.1%，浸泡48小时的小麦为0.8%混合拌匀并控制含水量为30%即得栽培种培养基；②栽培种的制作及培养：取栽培种培养基1kg装入规格为17cm×33cm的聚丙烯袋中，边装边压实，使栽培种培养基体积为聚丙烯袋体积的2/3，用玻璃丝扎口并留缝隙，再将聚丙烯袋在121～126℃ ，压力0.12～0.15Mpa的条件下灭菌1.5h后，冷却至室温，备用；将步骤（4）②培养的母种接入所述的装有栽培种培养基并经灭菌冷却至室温的聚丙烯袋中，25℃下培养20‑30d，菌丝长满菌袋后，转入室温下继培养10‑15d，每聚丙烯袋中母种接入量为10g，栽培种培养基四周长满金黄色菌核时，即得到羊肚菌优质菌种。