[发明专利]一种猪伪狂犬病毒纯化方法

摘要

本发明提供了一种猪伪狂犬病毒纯化方法，该方法综合采用了微滤澄清纯化法，超滤浓缩纯化法，重复洗滤法等一系列工艺，最大限度的增大了PRV的回收效率，降低了纯化成本。以本发明制备的猪伪狂犬病毒浓缩液成品尤其适宜于制备疫苗，以本发明制备的猪伪狂犬病毒浓缩液成品制备的疫苗相对于现有技术的猪伪狂犬病毒疫苗而言，具有安全性高，均一性好、免疫效果好等优点，同时，本发明工艺简便、成本较低，具有突出的规模化应用前景。

主权项

一种猪伪狂犬病毒纯化方法，其特征在于使用微滤澄清纯化系统和超滤浓缩纯化系统，并包括以下步骤：1）将无菌的吐温20按0.5%～10%(v/v)的比例加入猪伪狂犬病毒（PRV）病毒液中，振荡处理；2）将步骤1）振荡处理后的病毒液注入微滤澄清纯化系统的进料罐中，开启循环泵，循环一定时间后经0.45或0.65μm中空纤维微滤柱微滤，收集透过液，待用；3）以1:1(v/v)的比例将无菌的0.1M PBS缓冲液加入进料罐中的截留液中，重悬，开启循环泵循环一定时间，收集透过液，得到第一洗滤液待用；4）以1:1(v/v)的比例将无菌的0.1M PBS缓冲液加入到步骤3）处理完毕的进料罐中的截留液中，重悬，开启循环泵循环一定时间，收集透过液，得到第二洗滤液待用；5）以1:1(v/v)的比例将无菌的0.1M PBS缓冲液加入到步骤4）处理完毕的进料罐中的截留液中，重悬，开启循环泵循环一定时间，收集透过液，得到第三洗滤液待用；6）将上述透过液、第一洗滤液、第二洗滤液、第三洗滤液混合均匀，得到混合液；7）将步骤6）得到的混合液注入超滤浓缩纯化系统的进料罐，开启循环泵循环一定时间，经100KD或300KD中空纤维超滤柱进行过滤处理，弃去透过液，收集进料罐中剩余截留液，即为初级浓缩病毒液；8）以1:1(v/v)的比例将0.1M PBS注入进料罐中的初级浓缩病毒液中，重悬，开启循环泵循环一定时间，弃去透过液，收集进料罐中剩余截留液，即为二级浓缩病毒液；9）以1:1(v/v)的比例将0.1M PBS注入进料罐中的二级浓缩病毒液中，重悬，开启循环泵，循环一定时间，弃去洗滤液，收集进料罐中剩余截留液，即为三级浓缩病毒液；10）以1:1(v/v)的比例将0.1M PBS注入进料罐中的三级浓缩病毒液中，重悬，开启循环泵，循环一定时间，弃去洗滤液，收集进料罐中剩余截留液，即为病毒浓缩液成品。