[发明专利]磁性纳米粒子对地木耳藻蓝蛋白的分离纯化

摘要

本发明公开了一种磁性纳米粒子对地木耳藻蓝蛋白的分离纯化方法，特别设及一种利用磁性纳米吸附材料从地木耳中分离纯化藻蓝蛋白的方法。采用Fe₃O₄纳米粒子为磁性核层，无定型SiO₂包覆磁性纳米粒子，同时对核壳结构的纳米粒子进行表面改性，引入蛋白质亲和染料配基，制得了一种新型的磁性纳米粒子。该粒子加入地木耳粉的磷酸盐缓冲溶液(pH＝7.2)中，在20℃下吸附24‑72h后达到饱和，吸附饱和的磁性纳米粒子加入磷酸盐缓冲液(pH＝4.5)，于37℃脱附24h。经磁性分离得到脱附液，放入‑4℃冰箱中过夜，离心分离得到固体酶粉。该方法将分离与纯化一步完成，方法简单，条件温和，对藻蓝蛋白的活力影响较小，回收率较高。吸附饱和的磁性纳米粒子经洗脱分离出藻蓝蛋白后，经简单处理可以应用于下一次的吸附分离过程，多次重复利用基本不影响对地木耳藻蓝蛋白的分离效率。

主权项

1.磁性纳米粒子对地木耳藻蓝蛋白的分离纯化方法，其特征在于所用的磁性纳米粒子具有式(1)所示结构；分离纯化方法包括地木耳原料的预处理和藻蓝蛋白的吸附分离；对地木耳原料进行机械粉碎，地木耳粉中加入10‑20倍质量的0.02mol/L的pH=7.2 的磷酸盐缓冲溶液，温度为18‑32℃时浸泡2‑6h；浸泡结束后，将其放入超声波破碎机中，开启超声30‑90min，对地木耳粉细胞进行破壁处理；过滤去除固体粉末，取上清液待用；取地木耳粉上清液，向其中加入磁性纳米粒子，混合液放置恒温振荡器中，在20℃下以150r/min速度吸附24‑72h，磁性分离取得其中的固体粒子；将吸附饱和的磁性纳米粒子加入pH=4.5 的 磷酸盐缓冲液，放置于37℃恒温振荡器中，以150r/min速度脱附24h；经磁性分离得到脱附溶液，放入‑4℃冰箱中冷冻过夜，离心分离得到固体藻蓝蛋白粉，